Biuretmetoden

Biuretmetoden  är en av de kolorimetriska metoderna för kvantitativ bestämning av proteiner i lösning. Utvecklad 1949 av Gornall, Bardaville och David, används den nu lite i biokemisk laboratoriepraxis (med undantag för medicinska proteintester) på grund av låg känslighet.

Princip

Den är baserad på bildandet av ett biuretkomplex (har en lila färg) av peptidbindningar av proteiner med tvåvärda kopparjoner. Metoden använder den sk. biuretreagens, bestående av KOH , CuSO 4 och natriumcitrat (eller natriumtartrat ). I det resulterande komplexet är koppar bunden till 4 kväveatomer genom koordinationsbindningar och till 2 syreämnen genom elektrostatiska bindningar. Ett komplett komplex bildas endast med peptider som består av mer än 4 rester. Lösningens optiska densitet (direkt proportionell mot koncentrationen av peptiden) bestäms vid 540-560 nm.

Fördelarna med metoden inkluderar dess låga känslighet för främmande ämnen, låga fel.

Metodens känslighet är 2-10 mg/ml.

Andra metoder

Litteratur

Länkar