Ochoa, norr

Severo Ochoa
spanska  Severo Ochoa de Albornoz
Födelsedatum 24 september 1905( 1905-09-24 ) [1] [2] [3] […]
Födelseort Luarca , Spanien
Dödsdatum 1 november 1993( 1993-11-01 ) [1] [2] [3] […] (88 år)
En plats för döden Madrid , Spanien
Land  Spanien USA 
Vetenskaplig sfär biokemi
Arbetsplats
Alma mater
Akademisk examen PhD ( 1930 )
vetenskaplig rådgivare Otto Meyerhof
Henry Dale
Studenter Manuel Losada Villasante [d]
Utmärkelser och priser Nobelpriset Nobelpriset i fysiologi eller medicin ( 1959 )
Premio Lección Conmemorativa Jiménez Díaz ( 1969 )
US National Medal of Science ( 1979 )
 Mediafiler på Wikimedia Commons

Severo Ochoa de Albornoz ( spanska  Severo Ochoa de Albornoz ; 24 september 1905 , Luarca , Spanien  - 1 november 1993 , Madrid ) - spansk och amerikansk biokemist, vinnare av Nobelpriset i fysiologi eller medicin 1959 "för upptäckten av mekanismer för RNA- och DNA-biosyntes" [5] (tillsammans med A. Kornberg ).

Biografi och vetenskapligt arbete

Utbildning. Första verk

Severo Ochoa föddes den 25 september 1905 i Luarca, en liten stad i Asturien, vid Atlantens kust [6] . Han var den yngste av sju söner, hans far var advokat och affärsman och dog när Severo var 7 år gammal.

Efter sin fars död flyttade familjen, som försökte leva i ett medelhavsklimat, till Malaga , vid kusten, och bodde där från mitten av september till mitten av juni. Där gick Severo i en privat skola som stöddes av jesuiterna, och sedan på en gymnasieskola, där han tog en kandidatexamen 1921. Under sitt sista år på gymnasiet började han intressera sig för naturvetenskaperna och gick 1923 in på Medicinska fakulteten vid universitetet i Madrid. Han strävade aldrig efter att bli läkare, men medicinen tillät honom att studera biologi. Han fascinerades av den spanske neuroforskaren Santiago Ramón y Cajal och drömde om att studera histologi under honom. Men, till Severos stora ånger, flyttade Cajal, som redan var över 70 år, bort från vetenskapen när han började på Medicinska skolan. Severo Ochoa tröttnade dock aldrig på att läsa om Cajals biografi, och hans bok, Råd om vetenskaplig forskning, hade en enorm inverkan på Ochoa. Under sitt tredje år på läkarutbildningen bestämmer Ochoa sig för att ägna sitt liv åt att studera biologi.

Den andra forskaren som hade ett starkt inflytande på Severo Ochoa var en av hans lärare, Juan Negrin , som hade varit i Tyskland. Han rådde Ochoa att läsa andra böcker än spanska. Vid den tiden var det enda främmande språket som Ochoa talade franska, och hans efterföljande beslut att åka till Tyskland och England för att doktorera var föranlett av önskan att lära sig främmande språk. Professor Negrin gav Severo Ochoa och hans vän José Valdecasas möjlighet att forska i hans laboratorium på sin fritid. Han föreslog att de skulle isolera kreatininet från urinen. Severo Ochoa blev intresserad av kreatinets och kreatinins funktioner och metabolism. Ochoa och Valdecasas föreslog en enkel mikrometod för att bestämma koncentrationen av kreatin i muskler [7] . För att tillämpa denna metod och behärska det engelska språket tillbringade Ochoa två månader i Glasgow med professor Noel Paton, som arbetade med kreatinmetabolism. När han återvände till Spanien med goda kunskaper i engelska (han hade en naturlig förmåga att lära sig språk), skickade han in en artikel till Journal of Biological Chemistry som beskrev sin metod för att kvantifiera kreatin, och var glad över att finna att metoden accepterades efter lite tester [8] . Studien av kreatin väckte Ochoas intresse för muskelsammandragningens kemi och för den tyske forskaren Otto Meyerhoffs arbete med fosfokreatin, en nyupptäckt förening.

Jobb i Tyskland och England

Otto Meyerhof arbetade på Kaiser Wilhelm Institute (KWI), som grundades 1910 i Dahlem, en fashionabel förort till Berlin. Industrimän och bankirer, som insåg att Tysklands välfärd bygger på den snabba utvecklingen av de grundläggande vetenskaperna, försågs med stora medel. Två betydande personer inom biokemi - Karl Neuberg, institutets direktör och Otto Warburg - arbetade på KWI Meyerhof var intresserade av problemet: hur blir matens potentiella energi tillgänglig för cellen? Han valde muskeln som en experimentell modell för att försöka hitta sambandet mellan kemiska omvandlingar och värmeproduktion och mekaniskt arbete. Severo Ochoa bad Meyerhof att låta honom ägna lite tid i sitt laboratorium åt studier av både muskelkontraktion och Tyskland i allmänhet. Till sin glädje blev han antagen där och anlände till laboratoriet hösten 1929. Severo Ochoa kunde inte tyska, men Meyerhof talade engelska och två månader senare lärde Severo Ochoa sig tyska i en grad som räckte för vidare kommunikation. Fritz Lipman och David Nachmanson har också arbetat på KWI bland andra doktorander. En av de anmärkningsvärda egenskaperna hos KWI var önskan att ta bort barriären mellan fysik, kemi och biologi. KWI gav ett enormt uppsving för unga biokemister som Severo Ochoa och Fritz Lipman. Severo Ochoa studerade hur muskelkontraktion kunde använda annan energi än den från nedbrytningen av kolhydrater, och om nedbrytningen av fosfokreatinin påverkade sammandragningarna. Svaret kom senare (efter upptäckten av ATP) när Loman upptäckte att fosfokreatin regenererar ATP genom att överföra PO4 till ADP. I slutet av 1929 flyttade Meyerhof från Dahlem till Heidelberg, där Kaiser Wilhelm Society byggde en vacker ny byggnad, inklusive fyra forskningsinstitut (fysikalisk, kemisk, fysiologisk och experimentell medicin). Meyerhof utsågs till direktör för Fysiologiska institutet och Severo Ochoa flyttade med honom till Heidelberg. Han återvände till Madrid 1930 med en avhandling om binjurarnas roll vid muskelkontraktion och gifte sig 1931 med Carmen Cobian Garcia. Snart åkte han igen utomlands (med sin fru) till Henry Dales laboratorium (National Institute for Medical Research i London), där han arbetade på sitt första enzym, glyoxylas, och upprätthöll vänskapliga relationer med universitetet i Madrid. Ochoa stannade i London i två år och återvände från sin forskning om glyoxylas till binjurarnas roll i muskelkontraktion.

Sent 1930-tal. Flytta till USA

1935 befordrades Ochoa till chef för fysiologiska avdelningen vid det nya institutet i Madrid. Men några månader senare började det spanska inbördeskriget , och han bestämde sig för att lämna Spanien och återvända till Meyerhof. När Ochoa anlände till Tyskland 1936 befann sig landet på nazismens höjdpunkt, och Meyerhofs ställning var osäker. Hans laboratorium fungerade dock produktivt, men allvarliga förändringar ägde rum i det: från ett fysiologiskt laboratorium förvandlades det till ett laboratorium för biokemi. Glykolys och fermentering i muskler, jästisolering och partiella reaktioner katalyserade av renade enzymer var huvudämnena för studien. Denna period varade dock inte länge förrän Meyerhof flyttade till Paris i augusti 1939 och gick med i Institutet för biologi och fysikalisk kemi. Innan han lämnade fick Meyerhof Ochoa ett jobb på Marine Biology Laboratory i Plymouth i sex månader. Slutligen arbetade Ochoa med Rudolf Peters vid Oxford University. Arbetet med Peters om rollen av vitamin B1 (tiamin) och kokarboxylas (tiaminpyrofosforester) i pyruvatoxidation har varit mycket produktivt [9] [10] . De fann att kokarboxylas och konjugerad tiamin är koenzymer i denna process i duvans hjärna. De visade också behovet av adeninnukleotider, vilket tyder på den nära samexistensen av oxidation och fosforylering, vilket ökade Ochoas intresse för oxidativ fosforylering. Men Oxfordperioden varade inte länge på grund av andra världskriget. Laboratoriet användes för krigsarbete och Ochoa, som utlänning, fick sparken. Han bestämmer sig för att resa till USA och skriver till Carl och Gertie Corey ( Washington University School of Medicine i St Louis ); de tar honom dit. Corey hittar finansiering och i augusti 1940 seglar Carmen och Severo Ochoa till USA. Carl och Gertie Coreys labb var en fantastisk plats: fokus låg på enzymer, särskilt glykogenfosforylas. Ochoa lärde sig mycket, även om hans eget arbete med den enzymatiska mekanismen för omvandlingen av fruktos till glukos i leverextrakt var ganska nedslående. Men han förstod vikten av enzymisolering och karakteriseringstekniker och behärskade dem. 1942 tillträdde han en tjänst som forskningsassistent vid New York University School of Medicine (NYU).

Intermediär metabolism

Ochoa arbetade i två år vid New York University School of Medicine, varefter han flyttade till biokemiavdelningen i den gamla byggnaden tvärs över gatan, där han tog positionen som biträdande professor i biokemi. Två år senare blev han farmakolog. Den farmakologiska fakulteten var också baserad i en gammal byggnad och hade nya laboratorier, så Severo Ochoa fick mer utrymme och utökade sin verksamhet och rekryterade studenter och arbetare med examen. Hans första forskning vid New York University handlade om oxidativ fosforylering. Tidigare, i Oxford, visade Severo Ochoa att oxidation åtföljer fosforyleringen av AMP till ATP, efter överföringen av fosfor från ATP till socker [11] . Den obligatoriska samexistensen av fosforylering och pyruvatoxidation, som också bevisats av Belitzer i Sovjetunionen och Kalkar i Danmark, är en betydande upptäckt. Med hjälp av ett hjärthomogenat bestämde han atomförhållandet mellan förestrad fosfor och förbrukat syre (P/O-förhållande). Jämförelse av fosforylering orsakad av oxidation av pyrodruvsyra med den som orsakas av dismutation av pyrodruvsyra och fosfoglycerinsyra i hjärtextraktet gav P/O = 3 för den första reaktionen [12] . Tidigare var det 2; det låga P/O-värdet berodde på förluster orsakade av ATP-hydrolys av ATPas. Värdet på 3 bekräftades ytterligare av A. Lehninger med användning av mitokondrier. Efter att ha slutfört detta arbete trodde Severo Ochoa att mekanismen för oxidativ fosforylering inte kunde förstås utan ytterligare kunskap om de enzymatiska reaktionerna som uppstår under oxidation, särskilt de som åtföljer fosforylering. Som känt tack vare Krebs är trikarboxylsyracykeln den huvudsakliga födooxidationen i cellen, och Keelin och Warburg visade i sitt arbete att pyridinnukleotider, flavoproteiner och cytokromer är involverade i denna process. Ochoa valde isolimondehydrogenas att studera.

Det var känt att isocitrat bildades från citrat med hjälp av cis-akonitat, men reaktionen som ledde till α-ketoglutarat var inte bevisad, bara förutspådd, och Ochoa bestämde sig för att bereda den förmodade mellanprodukten "oxalosuccinic acid", vilket han uppnådde efter flera misslyckade försök. Med utgångspunkt i oxalbärnstenssyra observerade han bildandet av α-ketoglutarat och drog slutsatsen att oxalbärnstenssyra verkligen var en mellanprodukt i denna reaktion. Under tiden har biokemister blivit förvånade över fenomenet med CO 2 -fixering som äger rum i en heterotrof bakterie, som påvisats av Wood och Werkman. Ochoa kom till slutsatsen att reaktionen av isolimondehydrogenas är reversibel och bestämmer mekanismen för CO 2 -fixeringsprocessen i djurceller. Severo Ochoa-laboratoriet var inte utrustat med instrument som använde isotoper; han bestämde sig för att han kunde studera reaktionen som skulle resultera i oxidation av NADPH genom spektrofotometri om isocitrat bildas genom CO 2 -fixering på α-ketoglutarat. Men, som han skriver i Annual Reviews, trodde han inte att det skulle fungera och försenade experimentet tills han blev uppmuntrad av Evraim Rucker. De sistnämnda arbetade på avdelningen för mikrobiologi på våningen nedanför, och det var många diskussioner mellan dem. När Ochoa äntligen gjorde experimentet och såg spektrofotometernålen röra sig, vilket tydde på NADPH-oxidation [13] , var han så upprörd av lycka att han sprang ut och skrek: "Gå och se hur spektrofotometernålen rör sig!". Men med tanke på att klockan redan var 21.00 fanns det ingen i närheten. Spektrofotometern som experimentet utfördes på donerades till American Philosophical Society och skulle återlämnas ett år senare, men framgången med experimenten och behovet av en spektrometer för vidare arbete tvingade sällskapet att låta Ochoa behålla instrumentet. Därefter blir han en virtuos i den spektrofotometriska studien av oxidativa enzymer; ofta kunde reaktionen som studerades kopplas med tre eller fyra andra enzymatiska reaktioner tills kedjan var fullbordad, och NAD- eller NADP-beroende reaktioner där pyridinnukleotider oxiderades eller reducerades kunde utgöra grunden för kontinuerlig spektrometrisk studie av enzymaktivitet. Länge var denna spektrofotometer den enda på hela fakulteten - framgångsrika amerikanska laboratorier hade det inte så bra som det ibland verkade.

Under denna tid hade Severo Ochoa sin första doktorand, Alan Mehler, samt två doktorander: Santiago Grisolia och Arthur Kornberg. En dag märkte Alan, medan han observerade bildandet av pyruvat från malat, snabb oxidation av malat när NADP tillsattes till duvleverextrakt. Detta ledde till upptäckten av "äpple"-enzymet - malatdehydrogenas [14] . Enzymet katalyserar den reversibla reaktionen:

malat + NADP ↔ pyruvat + CO 2 + NADPH + H.

"Äppel"-enzymet katalyserar också bildningen av pyruvat från oxaloacetat, vilket fortsätter med frisättningen av CO 2 och reduktionen av NADPH-malat. Det fungerar i fettsyraoxidation medierad av koenzym A och NADPH. De drog slutsatsen att det var ett enzym med två aktiva platser. Detta påminde dem om den isocitriska dehydrogenasreaktionen och ledde dem till slutsatsen att isocitrisk dehydrogenas, som katalyserar två reaktioner, som tidigare nämnts, också har två aktiva ställen: en för isocitrat , den andra för oxidation av oxalosuccinsyra, och att det är inte en blandning av två enzymer - isolimon dehydrogenas och oxalosuccinic dehydrogenas - som tidigare trott.

"Äppel"-enzymet användes av Wolf Vishniak och Ochoa för reduktiv karboxylering av pyruvat till malat i närvaro av granspenat och NADPH [15] . Detta var den första demonstrationen av fotokemisk reduktion av pyridinnukleotider med kloroplastberedningar. 1948 flyttade Joe Stern, en före detta doktorand till Hans Krebs, till Severo Ochoa-laboratoriet med graden av doktor i naturvetenskap. Ochoa bestämmer sig för att det är dags att arbeta på det mest intressanta enzymet i Krebs-cykeln, det som gör citrat från oxaloacetat och aktivt acetat. Det var känt som det "kondenserbara" enzymet. Djurvävnadsextraktet var dock inaktivt i citratsyntesen, men de tappade inte modet och trodde att detta berodde på enzymets olöslighet. De ändrade bakterien i hopp om att enzymet skulle lösas upp. Att använda de organismer som är bäst lämpade för att lösa problemet var ett kännetecken för Severo Ochoa. Slutligen, genom att kombinera extrakt av Escherichia coli och grishjärta, uppnår de en god syntes av citrat från acetylfosfat och oxaloacetat i närvaro av katalytiska mängder av koenzym A. Som senare fastställdes av Earl Stadtman, skyddar extraktet av E. coli " "transacetylasenzymet. Detta enzym katalyserar överföringen av en acetylgrupp från acetylfosfat till koenzym A och bildar acetyl CoA + PO4. Grishjärtaextrakt skyddar det kondenserande enzymet. De renade det kondenserande enzymet till ett homogent tillstånd och Ochoa, som tillsatte några droppar ammoniumsulfat, kristalliserade det [16] . Han var väldigt stolt och fotograferade kristallerna. Senare, i en gemensam studie med Feodor Linen, visade han att det kondenserande enzymet katalyserar den reversibla omvandlingen av acetyl CoA och oxaloacetat till CoA + citrat [17] . Ochoa var verkligen mycket intresserad av de tidiga stadierna av pyruvatoxidation. Samtidigt ägnar Irvin Gonzalus en del tid åt att arbeta på ett anslag och studerar tillsammans med Seymour Corques och Alice del Campillo oxidationen av pyruvat i Escherichia coli [18] . Ochoas laboratorium insåg vikten av acetyl CoA som en mellanprodukt i ämnesomsättningen och började undersöka den viktiga frågan om fettsyrametabolism. CoA-transferas upptäcktes av Joe Stern och Minor Kuhn [19] . Joe Stern identifierade också enzymet krotonas, som kristalliserades av Alice del Compiglio. Krotonas katalyserar uttorkningen av β-hydroxibutyryl CoA för att bilda krotonyl CoA. Crotonil CoA omvandlas vidare till Butyryl CoA. Detta enzym är nära besläktat med föreningen som härrör från oxidation av udda fettsyror och vissa aminosyror.

Det har också förekommit flera rapporter om att propionatoxidation involverar CO2-fixering och leder till bildning av succinat . Severo Ochoa ber Martin Flavin, som har anslutit sig till gruppen, att undersöka processen. Flavin, med hjälp av ett grishjärtaextrakt, fann att detta extrakt omvandlar propionat till dikarboxylsyra, men denna syra är inte bärnstenssyra, utan metylmalonat [20] [21] . Arbetet av M. Flavin, J. Casiro, E. Leone, P. Langiel, R. Matsunder och andra visar att propionat först omvandlas till propionyl CoA-karboxylas, ett enzym som innehåller biotin; sedan isomeriserar metylmalonyl CoA till A- och B-formerna. B-formen ger succinyl CoA från metylmalonylmutas [22] ; mutas är ett B12-enzym. Propionyl CoA karboxylas kristalliserat av Casiro karboxyleras och överför karboxylgruppen till propionyl CoA.

Ett intressant trikarboxylsyracykelenzym upptäckt av Kaufman i spenat katalyserar syntesen av ATF från ADF, Pi och succinyl CoA. Succinyl-CoA deacetylerades sedan till succinat och CoA [23] [24] . Enzymet betecknades som fosforylerande enzym eller P-enzym och sedan succinicthiokenas. P-enzymet är involverat i sub-country fosforylering efter dekarboxyleringen av ketoglutarat i Krebs-cykeln. Detta enzym övertygade Ochoa att återvända till studiet av oxidativ fosforylering.

Polynukleotidfosforylas

1955 isolerade han tillsammans med doktoranden Marianna Grünberg-Manago (infödd i Ryssland, senare en välkänd biokemist som arbetade i Frankrike), ett nytt enzym från mikroorganismen Azotobacter vinelandi, som katalyserade in vitro- syntesen av en liknande molekyl till RNA, bestående av 4, 3, 2 och till och med en kvävehaltig bas. Enzymet fick namnet "polynukleotidfosforylas". Noggranna experiment har visat att den syntetiska polyribonukleotiden liknar naturligt RNA i storlek. Dess molekylvikt varierade från 30 000 till 1-2 x 106 Da. Sedimentationskonstanterna var också likartade. För att genomföra en pålitlig RNA-syntesreaktion krävdes ett högrenat enzym, för vilket kromatografi användes. Dessutom, för att initiera syntesen, var det nödvändigt att tillsätta en liten mängd oligomer till lösningen, sedan växer polymerkedjan. När den syntetiserade RNA-liknande polymeren behandlas med pankreatisk ribonukleas erhålls en blandning av oligonukleotider, samma sak som när naturligt RNA klyvs under liknande förhållanden. I experiment med hydrolys av den syntetiserade polymeren med användning av fosfodiesteras isolerat från ormgift och mjältvävnad, visades att det experimentellt erhållna RNA:t är en linjär kedja, vars nukleosidenheter är sammanlänkade av 3,5'-fosfodiesterbryggor. Två år senare isolerade Arthur Kornberg enzymet DNA-polymeras från Escherichia coli och använde det för att syntetisera DNA. 1959 tilldelades båda forskarna Nobelpriset [25] [26] [27] [28] .

Genetisk kod

Sedan upptäckten av polynukleotidfosforylas har Severo Ochoas labb fokuserat främst på två saker: propionatoxidation, som studerades av läkare som kom efter att Martin Flavin lämnade, och polynukleotidfosforylas i sig. Ochoa arbetade med en ny japansk forskare, Sanai Mi, på en fusionsreaktion, i hopp om att med ytterligare rening av enzymet, skulle primer- eller mallbegränsningarna klargöras. Detta var faktiskt den enda gången som ett proteolyserande enzym behövde en primer för polymersyntes. Även om dessa studier inte har visat sig användbara i framtiden för att bestämma rollen för enzymet in vivo , har de varit extremt användbara vid syntesen av många polymerer. Därmed var Ochoas laboratorium redo för in vitro-experiment på den genetiska koden.

Det allmänna begreppet mRNA formulerades på 1960-talet och 1961 rapporterade Nirenberg och Mattai, vid International Congress of Biochemistry i Moskva, att ett extrakt av Escherichia coli överför polyuridylat (poly U) till polyfenylalanin. Detta var den mest spännande nyheten på kongressen, varefter det stod klart att ett stort fält öppnade upp för experiment i studien av den genetiska koden. En kapplöpning började under de följande månaderna mellan laboratorierna i Ochoa och Nirenberg för att studera effekten som olika sampolymerer hade på kombinationen av aminosyror. Genom att beräkna den statistiska konstruktionen av tripletter i heteropolymerer var det möjligt att bestämma deras förhållande för de flesta aminosyror [29] [30] . Peter Lengiel, Joe Speyer, Wendy Stanley och Albert Wabha var inblandade, men Ochoa ledde personligen projektet, och fakultetens tekniska resurser ägnades helt åt att syntetisera så många av de föreningar som avkodningsjobbet behövde.

Det tog alltså inte lång tid att identifiera tripletterna som kodar för var och en av de 20 aminosyrorna, och det tog inte heller lång tid att visa att koden var omvänd i många fall, vissa tripletter kodar för samma aminosyror. Triplettsekvensen som definierar aminosyror bestämdes av Phillip Leder och Marshall Nirenberg efter upptäckten att specifika bastriplettsekvenser underlättade bindningen av specifika aminoacyl-tRNA till ribosomen. Detta tillkännagavs vid International Congress of Biochemistry i New York 1964. Genom kemisk isolering av motsvarande mRNA bekräftades koden för aminosyrorna vackert av Gobin Khoran med användning av oligooxiribonukleotidsyntes och transkription med RNA-polymeras. Terminal trillingar hittades i de ursprungliga genetiska experimenten av Sidney Brenner vid Cambridge och Garen vid Yale. En markör från Cambridge upptäckte att AUG är kodonet som initierar kedjan. Med hjälp av polynukleotider som börjar vid AUG eller ett annat kodon framställt med polynukleotidfosforylas, bestämde Severo Ochoa-laboratoriet att läsriktningen var 5' till 3' [31] [32] . Han bestämde också in vitro att UAA är ett av de terminala kodonen [33] .

Initiering av gener för proteinsyntes

Tre grupper på en gång - Margarita Salas och Stanley i Ochoa, Eisenstadt och Bravermann och Revel med Gross fann att naturligt mRNA, som MS2 och QB från bakteriofager, överförs av orenade ribosomer av Escherichia coli och ribosomer tvättas med 0,5 eller 1 M ammoniumsulfat överförs inte.. Tvättade ribosomer tolererar dock lätt polyA eller polyU, men inte polymerer som börjar med AUG, som beter sig som naturliga mRNA. Det upptäcktes att ammoniumsulfat tvättar ut en proteingen som finns där, kallad "initieringsgenen", nödvändig för överföring av naturligt mRNA eller polynukleotider som börjar med AUG [34] [35] . De två första generna, och senare en tredje, isolerades och kallas nu IF1, IF2 och IF3 [36] . Samtidigt visade Clarke och Marker att bakteriens polypeptidkedjor börjar med en specifik metyl-tRNAfMet, som förestrar metionin, som i sin tur produceras och återfinns i polypeptidkedjan vid den terminala aminpositionen. Metyl-tRNAfMet kodas av AUG, och metyl-tRNAfMet-förlängaren kan inte produceras av ett specifikt formylas. Att förstå rollerna för IF1 och IF3 och händelseförloppet som leder till initieringen av komplexbildning i E. coli har varit kontroversiellt och debatterat, även inom Ochoas grupp. Nu är detta klart tack vare forskning från många forskare.

I början av 1970-talet gick Ochoa över till att studera translationsinitiering i eukaryoter [37] . Richard Sweet var den första som upptäckte initieringsgener i eukaryoter 1968. IF2-analoger isolerades sedan i flera laboratorier (Daniel Levin, Theo Staelin, Naba Gupta). eIF2, som det nu kallas, består av en kedja av tre polypeptider, och dess funktion är att bilda ett trekomponentskomplex av GTP och tRNA-initiatorn metyl-tRNA, som inte producerar metionin. Detta tRNA är emellertid separat från metyl-tRNA-förlängaren. I närvaro av 40S-ribosomsubenheter ger det ternära komplexet upphov till ett 40S-initieringskomplex. Samtidigt som vissa andra grupper (London, Wurma), isolerade Ochoa och de Haro en proteingen som de kallade ESP [38] ; detta protein hade många namn beroende på vilken grupp som upptäckte det, men nu heter det EiF2B. Dess verkningssätt förklarades mycket senare. Det katalyserar utbytesreaktionen mellan GTP och BNP, isolerar BNP och ersätter den med GTP. eIF2B isolerades under arbetet med hemets roll i globinsyntes av retikulocytlysat. Heme förhindrar fosforylering av små eIF2a-subenheter av ett specifikt kinas [39] . När eIF2α är fosforylerad binder den stabilt till ett ternärt komplex och förhindrar att eIF2B frisätts från den katalyserade utbytesreaktionen. Mekanismen är att eIF2B är större än eIF2, så endast partiell fosforylering av eIF2 är tillräcklig för att förhindra att eIF2B agerar genom att isolera det.

RNA-replikation av viruset

Severo Ochoa var intresserad av enzymet som ansvarar för syntesen av RNA i det virala RNA-genomet, och när Charles Weissman kom till sin fakultet 1961 föreslog han att han skulle ta upp RNA-replikation. Till en början, tillsammans med Joe Krakow, började Weissmann studera tobaksmosaikvirus-RNA-replikation i spenatblad, men bytte snart till E. coli infekterad med f2- eller MS2-RNA [40] . Ochoa var alltid intresserad av arbetet, men deltog inte i det själv. Många forskare anslöt sig till Weissman vid olika tillfällen, som Martin Billeter, Roy Burdon och Peter Borst. En tävling hölls mellan grupperna Weissman, Spiegelman och August. Att förklara mekanismen för viral RNA-syntes var en svår uppgift, eftersom enzymet inte var lösligt. I slutändan var Qβ-viruset det bästa valet. Qβ-RNA-polymeras renades till ett homogent tillstånd och specifika begränsningar för Qβ-RNA-mallen bevisades. 1968 träffades alla tre grupperna och kom till en gemensam slutsats om mekanismen för RNA-replikation. I det första steget bildas en minuskedja på matrisens pluskedja, och mellanprodukten har en öppen struktur. Mallen och produkten bildar inte en dubbel helix, utan hålls samman under replikering. Strukturen kollapsar inom den dubbelsträngade strukturen endast när proteinerna extraheras. I det andra steget av replikering används den negativa strängen som en mall för syntesen av plussträngen. Detta komplex liknar det första, bara matrisen längs hela längden är en minuskedja.

Senaste åren

Sommaren 1974 gick 69-åriga Ochoa i pension från dekanusordföranden vid den biokemiska fakulteten. Han hade ett erbjudande att gå med i Rocher Institute for Molecular Biology i Nutley. Han accepterade det och fortsatte fram till 1985 sitt arbete med GTP/GDP-utbytesgenen i eukaryoter och på rollen av fosforylering i eukaryot initiering med J. Sikerka. 1985 återvände han och Carmen till Spanien, där han fortsatte att tjänstgöra som hederschef för Centre for Molecular Biology vid universitetet i Madrid. Centret grundades under hans ledning och är nu ett av de ledande centra för molekylärbiologi. Carmens död 1986 ödelade honom, och han återhämtade sig aldrig från denna chock, efter att ha förlorat meningen med livet. Han dog sju år efter det, i november 1993 i Madrid. De begravde honom i Luarca, staden där han föddes.

Slutsats

Livet för Severo Ochoa är lärorikt och kan ses som en sammanfattning av hela den moderna biokemins historia. Han tyckte om att prata om sitt arbete i gruppen, han hade inga hemligheter kring det. Så snart han blev biokemist drogs han till lärande och för detta var han i många laboratorier. Som han själv sa till sig själv oroade han sig inte för en fast plats och blev hela tiden förvånad. Den första positionen med en personalstab kom till honom först vid en ålder av 39-40 år. Biokemi var hans hobby [41] , men Carmen försökte hitta en balans mellan arbete och fritid i sitt liv. Carmen är också förmodligen ansvarig för att han, som älskar musik, sällan missade konserter. Han älskade också konstutställningar, teater och bra restauranger. Ochoa hade alltid det aristokratiska uppträdandet och uppförandet av en europeisk gentleman, och var sällan spänd, utan alltid orubblig i de konflikter som uppstod när det gällde att tolka resultat, skriva uppsatser och prioritera författare. Som vilken patriark som helst blev han väldigt upprörd när hans bästa elever och personal flög ut under hans vingar till ett självständigt liv. Trots att han blev amerikansk medborgare och njöt av livet i detta land, behöll han en speciell kärlek till Spanien, och hade nästan alltid en spanjor arbetande i sin grupp. Denna kärlek var ömsesidig: även om han bodde utomlands var han utan tvekan en av de mest kända personerna i sitt land. De flesta spanska städer har en gata som bär hans namn, hans porträtt kan ses på en restaurang i Madrid där han gillade att gå, det finns ett museum i Valencia skapat av hans kollega Santiago Grisolia, och hans bild finns på vaxmuseet i Barcelona . Han gav impulser till karriärerna för många av sina elever, från Arthur Kornberg till Charles Weissman, av vilka många blev kända vetenskapsmän.

Severo Ochoa har mottagit många utmärkelser. Han var medlem av American National Academy of Sciences, American Academy of Sciences and Arts, en utländsk medlem av Royal Society of London och en utländsk medlem av USSR Academy of Sciences. Han hade 36 hedersdoktorer och över hundra medaljer och utmärkelser. Han var också ordförande för International Union of Biochemists från 1961 till 1967 och fick Nobelpriset 1959.

Marianne Grünberg-Managos memoarer [6]

Första gången jag träffade Severo Ochoa var 1952 i Paris vid den andra internationella kongressen för biokemi. Lång och stilig, då var han 47 år gammal; han såg ut som en spansk Hidalgo, med vilda bruna ögon och en mopp av vitt hår. På Sorbonne gjorde Ochoa ett starkt intryck med sin tydliga och informativa föreläsning om CO2-fixering under substratoxidation, som visade vackra kristaller av det kondenserade enzymet. Hans namn var välkänt i Frankrike, men främst från litteraturen, eftersom Europa just var på väg att återhämta sig från kriget och det var få internationella möten. Det var min första sådana konferens, så jag var orolig. Som doktorand vid den tiden insåg jag att jag ville forska i hans laboratorium, och min handledare Evgeny Abel presenterade mig för honom. Severo Ochoa talade flytande franska, och jag blev chockad när han godkände min förflyttning till honom vid New York University, och planerade en start i september 1953. Vi kom överens om att jag först skulle tillbringa några månader i laboratoriet hos Irving Gonzalus i Urbana. Ochoa var mycket nöjd med att han fick en doktorand och att jag beundrar Gonzalus arbete. Den senare godkände planen.

När jag kom till Severo Ochoa-laboratoriet i september 1953 efter några månaders enzymologiutbildning på Gonzaluslaboratoriet, låg det fortfarande i den gamla byggnaden (flyttade till den nya sommaren 1954). Jag blev besviken, speciellt när vi gick in i labbet, vi var tvungna att gå igenom anatomirummet där läkarstudenterna dissekerade kadaver. Men det var en mycket vänlig atmosfär i laboratoriet: det var trångt, men väldigt välorganiserat. Rummen var utrustade med allt som behövs för att alla ska känna sig oberoende och nöjda. Morton Schneider, chefsteknikern, och Peter Lozina ansvarade för pilotanläggningen, och om du hade ett problem kunde du alltid vända dig till Morton, som snabbt löste det. Gruppen var ganska liten: Joe Stern, Alice del Campillo, Seymour Kaufman och en grek med examen, S. Alvisatos. På fakulteten fanns också Charlie Gilvard, som sysslade med lysin och studerade diaminer. Han hade det mest kritiska och fantasifulla tänkesättet. Sarah Ratner var också en oberoende vetenskapsman som arbetade med de enzymatiska stegen i Krebs ureacykel. Martin Flavin och Bill Jacobi, som arbetade med myrhydrogenas, kom senare. En annan doktorand, Ernie Rose, dök upp samtidigt som jag. Severo Ochoa kom vanligtvis klockan 9 och slutade klockan 7, och dörren till hans kontor var nästan alltid öppen. I Storbritannien lärde han sig att arbeta produktivt utan att lägga ner mycket tid på det. Han diskuterade experimentet med olika grupper varje dag. När jag kom till laboratoriet fanns det en tradition i det, som Ochoa försökte hålla fast vid, att alla samlades till lunch och var och en, som det är brukligt i Amerika, med sin egen smörgås. Denna händelse ägde rum i ett av laboratoriets rum. Det verkade tråkigt och formellt för mig och Ernie, och vi bestämde oss för att skilja oss från de andra och gå på ett kafé. Två dagar senare fångade Ochoa oss och frågade: "varför kan jag inte se dig på lunchen?". Vi svarade att vi föredrar att gå på kaféer och att vi redan var trötta på smörgåsar, varpå han svarade: "Hur coolt, får jag följa med dig?". Från och med den dagen åt han med oss ​​och sedan hängde de andra med. Atmosfären i laboratoriet, som det händer ibland, har helt förändrats: den har blivit informell, avslappnad, mättad med utbyte av information om både vetenskapliga och vardagliga frågor. Samtalen var mycket intressanta: någon kunde ställa frågor eller komma på en teknik, och jag beundrade Ochoas förmåga att skapa en mycket vetenskaplig och lugn atmosfär under dessa luncher. På lördagarna gick vi på olika restauranger och det var även fika och kakor vid middagstid där vi kunde fortsätta diskussionerna.

Före min ankomst var laboratoriet utrustat för att arbeta med isotoper. Mekanismen för P-enzymreaktionen förstods snabbt genom att studera utbytesreaktionen mellan 32-fosformärkt ADP eller ATP och succinatmärkt succinyl-CoA. Dessa studier visade fosforyleringsmellanprodukter och ledde till en förståelse av detaljerna i reaktionsmekanismen. Metoden som användes var mycket lovande, och Severo Ochoa ville tillämpa den på andra reaktioner som involverade fosforylering. I synnerhet ansåg han att det var dags att studera tidens nyckel- och grundläggande problem: ATP-syntesen som sker under oxidativ fosforylering. Problemet med mekanismen för denna process hanterades av de mest prestigefyllda och stora grupperna (Green, Boyer, Lehninger , Dardy, Rucker, Conn), som konkurrerade med varandra. Innan han anförtrodde processen till sina nya forskare (Ernie och jag), var Severo Ochoa tvungen att testa vår förmåga att rena enzymer och studera deras egenskaper. Så han lät oss börja med ett annat problem som intresserade honom: mekanismen för acetatfosforylering av acetokinas (utan CoA som mellanprodukt):

acetat + ATP ↔ acetyl PO4 + ADP.

Han gav oss en flaska torkad E. coli, och vi insåg att vi var tvungna att arbeta med reningen och mekanismen för acetokinas med det som fanns i det. Vid den tiden hade produktiva proteinfraktioneringstekniker som laddningsutbyte och Sephadex-kromatografi ännu inte utvecklats. Rening bestod av fraktionering med salt i ett organiskt lösningsmedel vid låg temperatur och eluering från olika geler såsom kalciumfosfat. Jag minns hur många E. coli-celler vi slösade bort tills vi lärde oss hur man utför proceduren korrekt. Därefter studerade vi mekanismen som involverar samtidig bindning av en fosfatdonator och en acceptor av ett enzym i fröet, efter utbytet av fosfat med enzymet [25] . Ingen fosforylerad mellanprodukt var inblandad i mekanismen, och mekanismen imponerade inte särskilt mycket på oss, men träning i rening och enzymologi var användbar för oss, och enzymer behövdes. På förslag av Terri Stadtman, som arbetade i laboratoriet en tid, utvecklade jag ett förfarande för bestämning av acetat med acetokinas, och Terri använde sedan denna metod för några av sina studier [25] .

Jag minns med glädje den perioden av samarbete med Ernie Rose. Vi klarade testperioden framgångsrikt och runt jul bestämde sig Severo Ochoa för att anförtro oss sitt "drömprojekt" - oxidativ fosforylering. Ernie Rose bestämde sig för att testa det i råttmitokondrier. Eftersom han var fascinerad av Paul Boyers och Milred Cohns arbete på 18O isotoputbyte, ville han tillämpa metoden på sin forskning. Jag ville inte döda råttor och bestämde mig för att studera processen på bakterier. Jag bestämde mig för att genom att välja specifikt aeroba bakterier, såsom Azotobacter vinelandi, som aktivt oxiderar kolhydrater, kunde jag bättre isolera det aktiva systemet för ATP-syntes i kombination med oxidation. När jag insåg att det skulle vara svårt att upptäcka upptaget av ren PO4 i bakterieextrakt kontaminerade med fosfater och de olika reaktionerna som åtföljer deras upptag eller frisättning, bestämde jag mig för att använda utbytesreaktionen mellan PO4 och ATP (väl insatt i detta efter att ha studerat acetokinas) som en metod för att isolera några intressanta nya fosforylerade koenzymer. Tanken, som nu till synes naiv, var att en reaktion som involverade lösligt koenzym X som skulle fosforyleras av ett specifikt enzym under ATP-syntes skulle vara mycket enkel:

ATP + X ↔ XP + ADP ↔ ADP + P + X.

Naturligtvis observerade jag utbytet mellan 32PO4 och de två terminala fosfatgrupperna av ATP i Azotobacter vinelandi extraktlösning och började rena proteinet som var ansvarigt för utbytet. Som substrat använde jag kommersiell amorf ATP. Under detta arbete tillkännagav Sigma ett mycket rent kristallint derivat av ATP som de just hade förberett. Jag lyckades få i mig en del av detta ämne, och till min förvåning observerade jag inte längre en utbytesreaktion med ett kristallint derivat i närvaro av en proteinfraktion som jag delvis hade renat. Detta faktum gladde dock Severo Ochoa och mig, eftersom vi hoppades att det amorfa preparatet innehöll en intressant kofaktor. Jag bestämde mig för att isolera en fraktion från ett amorft preparat som, när det sattes till kristallint ATP, återstartade ämnesomsättningen. Vad var min förvåning när kromatografi identifierade detta ämne som ADP. I själva verket var ATP bara märkt, eftersom adenylatkinas fortfarande kontaminerade proteinfraktionen (det är känt att det är mycket svårt att bli av med spår av adenylatkinas). Jag hade detta i åtanke när jag berättade för gruppen vid lunchen om denna upptäckt. Ingen trodde mig, och Severo Ochoa slog mig och sa att det var omöjligt, men sedan ångrade han sig från detta, och efter att ha kommit till laboratoriet kunde jag lätt övertyga honom om att det sanna substratet i utbytesreaktionen var ADP . Han blev chockad, eftersom ingen kände till ett enzym som kan katalysera ett sådant utbyte, och godkände min strävan att försöka förstå vad som var ansvarigt för det i denna reaktion. Jag upptäckte snart att detta enzym inte är specifikt för ADP, utan katalyserar utbyte med andra difosfatnukleotider (UDP, CDP, GDP och IDP).

Sommaren 1954 blev Severo Ochoa dekanus för fakulteten för biokemi och flyttade till en ny byggnad tvärs över gatan. Det fanns mer utrymme, det fanns en pilotanläggning i källaren som drevs av Morton Schneider och Peter Lozina; det var också bekvämare att arbeta med radioaktiva isotoper där. Seymour Kaufman, Joe Stern och Alice del Campillo lämnade gruppen, medan Bill Jacobi, Martin Flavin och Charles Gilward blev kvar; nya medarbetare var Gegard Plaut och Enrico Cutolo. Här hade vi fler faciliteter för lunch, och vi fick besök av fler. Det är dags för ännu mer aktiva och glada stunder. Men efter den första spänningen att upptäcka en ny reaktion, tillbringade jag flera nedslående månader med att försöka göra några framsteg. Under denna tid gav Severo Ochoa mig helhjärtat stöd och uppmuntran i mina ansträngningar att ytterligare rena enzymet. Jag gjorde det här, men jag kunde fortfarande inte identifiera reaktionen: det var som om du har en proteinkristall, men du kan inte känna igen själva det kristalliserande proteinet. En del fosfat frigjordes under utbytet, men detta tillskrevs återstoden av fosfataskontamination. Severo Ochoa började bli besviken över att Pinchot vid denna tidpunkt hade isolerat olika fraktioner från Alcaligenes faecalis som, när de blandas, katalyserade upptaget av rena fosfatgrupper följt av elektronöverföring. Han började ifrågasätta värdet av utbytet och godkände mitt försök att återskapa Pinchots experiment med ett Azotobacter vinelandi-extrakt. Jag kom ihåg att Pinchot besökte oss och gjorde experiment i vårt laboratorium. Jag var dock inte redo att omedelbart lösa problemet. Framför allt blev jag överraskad av en liten frisättning av fosfat, samtidigt som jag visste att enzymet var väl renat från fosfatas, och bestämde mig för att spåra orsaken till detta fenomen.

Vid den här tiden åkte Severo Ochoa till Europa (jag tror på affärer relaterade till International Biochemical Union). Jag lovade honom att om jag inte hade några resultat innan han återvände, skulle jag igen börja leta efter en liten frisättning av PO4 i Azotobacter vinelandi-extrakt. Jag gjorde ett enkelt experiment som var avgörande för upptäckten av polynukleotidfosforylas: jag ersatte ADP med inosindifosfat (IDP). Adenylatkinas är inaktivt mot inosinderivat, och därför undvek jag komplexiteten hos mono- och triderivat som bildas av adenylatkinas och ritade en mättnadskurva. Difosfater var svåra att få tag på och dyra, och jag var tvungen att motivera att använda så många för vad som verkade vara ett trivialt experiment. Men i det mättade tillståndet (polynukleotidfosforylas har låg affinitet för difosfatderivat) fann jag en signifikant frisättning av fosfatgrupper. Det var en tröst att inse att jag inte bara hade att göra med en utbytesreaktion, utan också med en reaktion som producerar PO4. Jag började genast kromatografiskt identifiera en annan reaktionsprodukt. Från denna sida är reaktionen av hydrolys av difosfat till monofosfat fortfarande av intresse. Samtidigt arbetade Gegard Plaut på fakulteten och studerade IDP-as, som han isolerade från råttlevermitokondrier, men reaktionen i mitt fall såg reversibel ut, och reversibiliteten av hydrolytiska reaktioner verkade osannolik. Kromatografi av reaktionsblandningen på en Dowess-kolonn visade bildningen av IMP, vilket gladde mig, men till en början kunde jag inte identifiera några nya produkter i eluatet från kolonnen. Baserat på detta kan det syntetiserade enzymet ha varit en förening som inte eluerades under betingelserna för detta experiment. Jag började hoppas, utan att helt tro på detta, att produkten som satte sig i kolonnen kunde vara en förening med hög molekylvikt. Lyckligtvis kunde jag, med hjälp av kromatografiskt papper, identifiera en ny fläck av ultraviolett ljus i reaktionsblandningen efter den enzymatiska inkubationen, som inte kom från början av kromatogrammet, och insåg att det resulterande enzymet var en polynukleotid. Jag kommer aldrig att glömma dagen jag såg en ny plats - jag var så överväldigad av känslor att jag ville berätta för alla som var i laboratoriet om händelsen, men till min besvikelse, som i fallet med Severo Ochoa med ett kondenserande enzym , ingen var där - Det var en semester. Till slut ringde jag hem till Severo; han var förvånad över vad som hade hänt. Han var naturligtvis nöjd med upptäckten, men innerst inne hoppades han ändå att den syntetiserade produkten hade en pyrofosfatbindning och var på något sätt relaterad till oxidativ fosforylering. Detta illustrerar väl hur långt ifrån molekylärbiologin var då enzymologernas intressen. Nukleinsyrors enzymologi studerades sedan på andra ställen av små grupper, oftast engelska (Markham, Piri, Kalkar). Jag tror aldrig att jag hörde ordet "nukleinsyra" under mitt första år i New York. Men snart blev vi chockade över upptäckten. Severo Ochoa berättade för mig att när han höll ett seminarium om P-enzymet i Bezesda, nämnde han i slutet kort upptäckten (vi förstod inte strukturen på polymeren ännu) och såg hur sömnigt hela seminariet Kalkar plötsligt vaknade, hoppade i sin stol!

Med hjälp av Leon Heppel, Jacque Fresco och Alex Rich kom resultaten snabbt. Jag kunde visa att produkten fälldes ut med syra (detta var ännu ett fantastiskt ögonblick: jag såg hur polymeren bildade en fast gel; jag tror att Jacques Fresco fanns på den tiden) och upptäckte att polymeren hade en hög molekylvikt, vilket bestämdes först av Alex Rich. Jag upptäckte snart att polymeren hade två estergrupper. Leon Heppel hade till sitt förfogande alla enzymer som behövdes för att studera materiens struktur och gav oss med sin vanliga generositet allt vi behövde [26] . Med en blandning av adenosin, uridin, cytosin och guanosindifosfater kunde jag syntetisera en RNA-liknande sampolymer som inkluderade fyra baser [27] .

Vi diskuterade vad enzymet skulle heta. Severo Ochoa hoppades att det in vivo kunde vara involverat i någon form av (kanske i närvaro av en primer) polynukleotidsyntes, och var benägen att kalla det RNA-syntetas. Jag trodde i min tur att enzymet är inblandat i nedbrytningen av RNA, och trodde att det vore mer korrekt att kalla det fosforylas. Till slut sa Severo till mig: "Marianne, eftersom jag älskar dig väldigt mycket, accepterar jag ditt namn."

Jag presenterade arbetet vid ett möte med Federation of Societies for Experimental Biology i San Francisco 1955. Jag minns att salen var ganska tom före mitt tal och fylld till sista plats framför honom (ryktet om öppningen hade redan spridits). Arbetet väckte stort intresse: det var det första fallet av extracellulär syntes av en RNA-liknande makromolekylär substans. Upptäckten av polynukleotidfosforylas gav en stor impuls till forskningen av biokemister över hela världen: jag tvingade dem att studera inte bara mellanliggande metabolism och oxidativ fosforylering, utan även andra processer. Detta inspirerade dem att studera enzymer, såsom RNA- och DNA-polymeraser, ansvariga för syntesen av nukleinsyror. Biokemister blev intresserade av syntesen av proteiner och nukleinsyror. Detta gjorde det möjligt för laboratorierna av Paul Doty, Alex Rich, Jacque Fresco och Gary Felsenfeld att undersöka strukturen av DNA och RNA. På grund av enzymernas låga specificitet kunde olika polymerer syntetiseras med dem, vilket ledde till moderniseringen av syntestekniken av Doty-laboratoriet. Vid tiden för min upptäckt klargjordes DNA-strukturen av Watson och Crick, men kanske dess starkaste betydelse var dess användning för att dechiffrera det genetiska året (se nedan). För biokemister har en ny period kommit - perioden för bildandet av molekylärbiologi. Upptäckten belönades med Nobelpriset i medicin 1959 [28] . Priset delades med Arthur Kornberg för hans arbete med DNA-polymeras. Severo Ochoa erbjöd mig ett jobb och rådde mig att stanna i USA, där jag hade fler möjligheter än i Frankrike, med min karriär som exempel, men min man och jag bestämde oss så småningom för att återvända till Frankrike, särskilt för att jag väntade en dotter .

När jag kom tillbaka arbetade jag med enzymets struktur och dess roll in vivo . Det var svårare än det verkade först. Nu, från studier av många forskare, är det tydligt att det är involverat i nedbrytningen av mRNA, både tar bort budbärar-RNA och tillhandahåller prekursorer för syntesen av RNA och DNA. Jag är tacksam mot Severo Ochoa för den erfarenhet jag fick när jag arbetade i hans laboratorium, såväl som för den atmosfär som rådde i det, som han kunde skapa. Fram till nu har jag många vänner och bekanta till forskare från hans laboratorium, och vi känner oss alla som en del av familjen Severo Ochoa.

Anteckningar

  1. ↑ 1 2 Severo Ochoa // Encyclopædia Britannica 
  2. ↑ 1 2 Severo Ochoa // Brockhaus Encyclopedia  (tyskt) / Hrsg.: Bibliographisches Institut & FA Brockhaus , Wissen Media Verlag
  3. ↑ 1 2 Severo Ochoa de Albornoz // Gran Enciclopèdia Catalana  (kat.) - Grup Enciclopedia Catalana , 1968.
  4. ↑ https://sevilla.abc.es/sevilla/sevi-casi-siglos-formacion-cientifica-y-humanistica-instituto-san-isidoro-sevilla-201805130843_noticia.html
  5. ↑ Information på Nobelkommitténs webbplats Arkiverad 2 februari 2007 på Wayback Machine 
  6. ↑ 1 2 Biogr. Mems föll. R. Soc. vol. 43 351-365. (1997)
  7. ↑ EN MIKROMETOD FÖR UPPSKATTNING AV TOTALT KREATININ I MUSKEL
  8. ↑ (Med JG Valdecasas) En mikrometod för uppskattning av kreatinin i muskel J. Biol Chem. 81, 351-357. (1929)
  9. ↑ (Med R.A. Peters) Vitamin B1 och karboxylas i djurvävnader. Biochem. J. 32, 1501-1515 (1938)
  10. ↑ (Med I. Banga & R.A. Peters) Pyruvatoxidation i hjärnan. VII. Vissa dialyserbara komponenter i pyruvatoxidationssystemet. Biochem. J. 33, 1980-1996. (1939)
  11. ↑ Koppling av fosforylering med oxidation av pyrodruvsyra och hjärna. J Biol Chem. 138, 751-773 (1941)
  12. ↑ Effektivitet av aerob fosforylering i cellfria extrakt. J Biol Chem. 151, 493-505 (1943)
  13. ↑ Biosyntes av trikarboxylsyror genom koldioxidfixering. III. Enzymatiska mekanismer. J Biol Chem. 174, 133-157 (1948)
  14. ↑ (Med A. H. Mehler & A. Kornberg) Biosyntes av dikarboxylsyror genom koldioxidfixering. I. Isolering och egenskaper hos ett enzym från duvlever som cayalyserar den reversibla oxidativa dekarboxyleringen av I-äppelsyra. J Biol Chem. 174, 979-1000.
  15. ↑ (Med W. Vishniac) Fotokemisk reduktion av pyridinnukleotider genom spenatgrana och kopplad koldioxidfixering. Nature 167, 768-769 (1951)
  16. ↑ (Med JR Stern & MC Schneider) Enzymatisk syntes av citronsyra. II. Kristallint kondenserande enzym. J Biol. Chem. 193, 691-702
  17. ↑ (Med JR Stern & E Lynen,) Enzymatisk syntes av citronsyra. V. Reaktion av acetylkoenzym AJ Biol. Chem. 198, 313-321 (1952)
  18. ↑ (Med S. Korke & A. del Campillo) Biosyntes av dikarboxylsyror genom koldioxidfixering IV. Isolering och egenskaper hos ett adaptivt äppelenzym från Lactobacillus arabinosus. J Biol Chem. 187, 891-905. (1950)
  19. ↑ Stern, JR, Coon, MJ, del Campillo, A. & Schneider, MC 1956 Enzymes of fatty ecid metabolism. IV. Beredning och egenskaper hos coenzym a transferas. J Biol. Chem. 221, 15-31
  20. ↑ (Med M. Flavin) Metabolism av propionsyra i djurvävnader. I. Enzymatisk omvandling av propionat till succinat. J Biol. Chem. 229, 965-979 (1957)
  21. ↑ (Med M. Flavin & H. Castro-Mendoza) Metabolism av propionsyra i djurvävnader. II. Propionylkoenzym Ett karboxyleringssystem. J Biol. Chem. 229, 981-996
  22. ↑ (Med Y. Kaziro & E. Leone) Biotin och propionylkarboxylas. Proc. Natn. Acad. sci. USA 46, 1319-1327. (1960)
  23. ↑ (Med S. Kaufman, C. Gilvarg & O. Cori) Enzymatisk oxidation av a-ketoglutarat och parfosforylering. J Biol. Chem. 203, 869-888. (1953)
  24. ↑ Kaufman, S. Studier av mekanismen för reaktionen som katalyseras av det fosforylerande enzymet. J Biol. Chem. 216, 153-164. (1955)
  25. ↑ 1 2 3 (Med IA Rose, M. Grunberg-Manago & SR Korey) Enzymatisk fosforylering av acetat. J Biol. Chem. 211, 737-756. (1954)
  26. ↑ 1 2 (Med M. Grunberg-Manago) Enzymatisk syntes och nedbrytning av polynukleotider; fosforylaspolynukleotid. J. Am. Chem. soc. 77, 3165-3166. (1955)
  27. ↑ 1 2 (Med M. Grunberg-Manago & PJ Ortiz) Enzymatisk syntes av polynukleotider. I. Polynukleotidfosforylas av Azotobacter vinalandii. biochim. Biophys. Acta 20, 269-285. (1956)
  28. ↑ 1 2 Nobelföreläsningar 1959. Stockholm, s. 146-164.
  29. ↑ (Med P. Lengyel & JF Speyer) Syntetiska polynukleotider och aminosyrakoden Proc. Natn. Acad. sci. USA 47, 1936-1942.
  30. ↑ Lengyel, P. 1962 Användningen av syntetiska polynukleotider vid dechiffreringen av den genetiska koden. Doktorsavhandling. New York University. J Biol Chem. 216, 153-164.
  31. ↑ (Med M. Salas, MA Smith, WM Stanley Jr & AJ Wahba) Riktning för läsning av det genetiska meddelandet. J Biol Chem. 240, 3988-3995. (1965)
  32. ↑ (Med MA Smith, M. Salas, WM Stanley Jr & AJ Whaba) Riktning för läsning av det genetiska meddelandet. Proc. Natn. Acad.Sci. USA 55, 141-147
  33. ↑ (Med JA Last, WM Stanley Jr., M. Salas, MB Hille & AJ Wahba) Översättning av det genetiska meddelandet, IV UAA som ett kedjetermineringskodon. Proc. Natn. Acad. Sci USA 57, 1062-1067
  34. ↑ (Med WM Stanley Jr, M. Salas & AJ Wahba) Översättning av det generiska meddelandet: Faktorer involverade i initieringen av proteinsyntes. Proc. Natn. Acad. sci. USA 56, 290-295. (1966)
  35. ↑ (Med M. Salas, MB Hille, JA Last & AJ Wahba) Översättning av meddelandet om genetisk kod. II. Effekt av initieringsfaktorer på bindningen av formyl-metionyl-tRNA till ribosomer. Proc. Natn. Acad.Sci USA 57, 387-394. (1967)
  36. ↑ (Med K. Iawasaki, S. Sabo & AJ Wahba) Översättning av det genetiska meddelandet. VII. Initieringsfaktorernas roll i bildandet av kedjeinitieringskomplexet med Escherichia coli-ribosomer. Arch Biochem. Biophys. 125, 542-547. (1968)
  37. ↑ (Med M. Zasloff) Polypeptidkedjeinitiering i eukaryoter. IV. Rening och egenskaper hos supernatant initieringsfaktor från Artemia salina embryon. J. Mol. Biol. 73, 65-76. (1973)
  38. ↑ (Med C. de Haro) Ytterligare studier om verkningssättet för den heme-kontrollerade translationshämmaren. Proc. Natn. Acad. Sci USA 76,1741-1745. (1979)
  39. ↑ (Med A. Datta, C. de Haro & JM Sierra) Mekanism för translationell kontroll av hemin i retikulotcytlysat. Proc. Natn. Acad. Sci.USA 74, 3326-3329. (1977)
  40. ↑ Weismann, C. 1976 I Reflections on biochemistry (red. A. Kornberg, BL Horecker, L. Cornudella & J. Oro), pp. 283-292. New York: Pergamon.
  41. ↑ Utövandet av en hobby. L. Rev. Biochem., 491-530. (1980)

Länkar

  Gå till Wikidata-objektet  Tematiska platser
Ordböcker och uppslagsverk
Släktforskning och nekropol