Fotoblekning

Den aktuella versionen av sidan har ännu inte granskats av erfarna bidragsgivare och kan skilja sig väsentligt från versionen som granskades den 8 juli 2019; verifiering kräver 1 redigering .

Fotoblekning ( fotoblekning, ljusblekning ) är den fotokemiska förstörelsen av en fluorofor . I mikroskopi kan fotoblekning göra det svårt att observera fluorescerande molekyler , eftersom de senare förstörs med tiden när de bestrålas med ljus som orsakar fluorescens.

Fotoblekning kan användas före applicering av antikroppskopplade fluoroforer för att släcka autofluorescens, vilket minskar bakgrundssignalnivån.

Ljusblekning kan användas för att studera molekylers rörelse eller diffusion , till exempel med användning av ( eng. FRAP , Fluorescence recovery after photobleaching ) eller ( eng. FLIP , Fluorescence loss in photobleaching ).

Att minska effekten av fotoblekning kan kontrolleras genom att minska intensiteten eller varaktigheten av exponeringen för ljus, öka koncentrationen av fluoroforen, minska frekvensen (och fotonenergin) hos det absorberade ljuset eller använda fluoroforer som är mer motståndskraftiga mot nedbrytning, t.ex. som Alexa eller DyLight Fluor.

Varaktighet

Beroende på deras speciella kemi kan molekyler fotobleka efter att ha absorberat några få fotoner, medan starkare molekyler kan gå igenom många absorptions-/emissionscykler innan de bryts ned:

Grönt fluorescerande protein ( eng. GFP ): 10 4 −10 5 ; 0,1-1s
Vanligt organiskt färgämne: 10 5 -10 6 ; 1-10 s
CdSe/ZnS: 108 ; > 1000 minuter

Länkar

Introduktion till optisk mikroskopi . Fotoblekningsartikel (på engelska)
Viegas MS, Martins TC, Seco F., do Carmo A. En förbättrad och kostnadseffektiv metod för reduktion av autofluorescens i direkta immunfluorescensstudier på formalinfixerade paraffininbäddade vävnader (engelska) // Eur J Histochem : journal. - 2007. - Vol. 51 , nr. 1 . - S. 59-66 . — PMID 17548270 .