Isoelektrisk fokusering ( IEF , engelska IEF ), eller elektrofokusering är en teknik för att separera molekyler (oftast proteiner ) genom skillnaden i deras isoelektriska punkter . Detta är en typ av zonelektrofores , som vanligtvis utförs i en gel. Ett protein som befinner sig i pH - zonen under sin egen isoelektriska punkt kommer att vara positivt laddat och kommer att röra sig mot katoden . Som ett resultat av rörelsen kommer laddningen av molekylen att minska, och rörelsen kommer att sakta ner. Som ett resultat kommer proteinerna att bilda tydliga band, och varje protein kommer att placeras i pH-gradienten enligt dess isoelektriska punkt. Denna teknologi gör det möjligt att mycket tydligt separera proteiner som skiljer sig i isoelektrisk punkt.
Metoden används för att studera proteiner som skiljer sig i isoelektriska punktvärden, det vill säga förhållandet mellan sura och basiska aminosyrarester . Proteiner appliceras på en immobiliserad pH-gradient av en polyakrylamid- eller agarosgel . Isoelektrisk fokusering låter dig separera proteiner som skiljer sig i isoelektriska punkter med mindre än 0,01. [1] Isoelektrisk fokusering är det första steget i att utföra tvådimensionell elektrofores , där proteiner först separeras av isoelektriska punkter och sedan genom molekylvikt med hjälp av polyakrylamidgelelektrofores .