Immunokromatografisk analys

Den aktuella versionen av sidan har ännu inte granskats av erfarna bidragsgivare och kan skilja sig väsentligt från versionen som granskades den 22 januari 2017; kontroller kräver 16 redigeringar .

Immunokromatografisk analys (IHA)  ( eng.  Lateral flow test ) är en immunokemisk analysmetod som bygger på principen om tunnskiktskromatografi och inkluderar reaktionen mellan ett antigen och dess motsvarande antikropp i biologiska material. Det utförs med hjälp av speciella testremsor, paneler eller testkassetter.

Essensen av metoden

Funktionsprincipen är att när en testremsa är nedsänkt i en biologisk vätska (eller annat vätskeprov), börjar den migrera längs remsan enligt principen om tunnskiktskromatografi. Tillsammans med det rör sig märkta specifika antikroppar som appliceras på botten av testremsan, vilka affinitet binder till analyten.

Det finns två former av ICA: direkt och konkurrenskraftig metod.

  1. Det direkta (sandwich) ICA-schemat använder ett antikroppsmärkt konjugat applicerat på konjugatmembranet. På testlinjen immobiliserades antikroppar specifika för denna analyt, och på kontrolllinjen immobiliserades anti-artantikroppar specifika för de primära antikropparna. När ett prov som innehåller en analyt appliceras, när provet träffar membranet med konjugatet, binder analyten till At-tag-konjugatet. Sedan går immunkomplexet in i testzonen, där det binder till specifika antikroppar och bildar en "smörgås" av Ab-Ag-Ab-etiketten. Överskott av obundet konjugat binder till anti-artantikroppar i kontrolllinjen. Detekteringen av 2 streck på testremsan är således ett positivt testresultat. I frånvaro av en analyt i provet binder konjugatet till anti-artantikroppar endast på kontrolllinjen och bildar en enda linje på testremsan. Den direkta ICA-metoden används för att detektera makromolekylära föreningar - virus, inklusive HIV; olika hormoner (till exempel vid graviditetstest), patogener av infektionssjukdomar.
  2. Den kompetitiva ICA- metoden som används för bestämning av föreningar med låg molekylvikt är baserad på konkurrensen mellan analyten och det immobiliserade analyt:bärarproteinkonjugatet för ett begränsat antal specifika antikroppsbindningsställen som finns i At-tag-konjugatet. När ett prov som innehåller en analyt appliceras, binder det till At-tag-konjugatet på membranet med konjugatet. Därefter passerar immunkomplexet genom testzonen, där analyt:bärarproteinkonjugatet immobiliseras. Immunkomplexet kan inte binda till detta konjugat på grund av steriskt hinder: föreningar med låg molekylvikt har vanligtvis en antigen determinant och följaktligen har antikroppar ett bindningsställe för ett antigen som redan är en upptagen analyt. Därefter binds immunkomplexet av anti-artantikroppar som finns på kontrolllinjen. Som ett resultat indikerar frånvaron av ett färgat band i testzonen och närvaron av färg i kontrollzonen att koncentrationen av analyten i testprovet överskrider dess tröskelvärde för detta test.

I frånvaro av en analyt i provet binder At-tag-konjugatet till Ag:bärarproteinkonjugatet immobiliserat i testlinjezonen. Det obundna At-tag-konjugatet går in i kontrolllinjens zon och binder dit med anti-artantikroppar. Således är närvaron av två färgade linjer (test och kontroll) ett negativt resultat av analysen.

En form av kompetitiv ICA används för att detektera lågmolekylära föreningar, inklusive metaboliter av narkotiska föreningar i urin, munvätska och vävnadsextrakt.

Fördelen med metoden är dess snabbhet och användarvänlighet, möjligheten att använda icke-instrument ICA-formulär med en visuell bedömning av analysresultatet. I detta fall krävs ingen utrustning och analysen kan utföras av en icke-specialist under alla förhållanden, inklusive "fält".

Det finns också instrumentella semi-kvantitativa och kvantitativa former av ICA, som använder speciella läsare för att registrera intensiteten på etiketten i testzonen på testremsan.

Etiketter som används i IHA

Olika partiklar används som etiketter i ICA, som har följande egenskaper:

  1. Färgämnen (nano-partiklar av kolloidalt guld eller kol, eller partiklar av färgad latex). I detta fall används visuell detektering av resultatet, eller instrumentell kolorimetrisk bestämning (eller skanning). Användningen av olika färgetiketter fästa på latexpartiklarna möjliggör en multianalys där olika färgade linjer motsvarar olika analyter. Den vanligaste etiketten är kolloidala guldnanopartiklar.
  2. Fluorescerande, fosforescerande och bioluminescerande märkningar kovalent bundna till latexpartiklar. Dessa etiketter används endast i instrumentella versioner av ICA, när resultatet registreras av en speciell läsare (sensor). Bland ovanstående är fluorescerande märkningar de vanligaste.
  3. Paramagnetiska taggar (även fästa på latexpartiklar). Denna typ av märken används i ICA med hjälp av enheter som registrerar styrkan på magnetfältet.
  4. Enzymmärkningar används på samma sätt som i ELISA. Den enzymatiska reaktionen registreras genom färgning av substraten och resultatet av analysen är visuellt eller avläst av en sensor.
  5. En ny riktning i utvecklingen av olika typer av ICA är användningen av liposomer som bärare av olika typer av märkningar (färgande, fluorescerande, enzymatiska, elektroaktiva, etc.).

Litteratur

Länkar