Omvänd transkription PCR
Den aktuella versionen av sidan har ännu inte granskats av erfarna bidragsgivare och kan skilja sig väsentligt från versionen som granskades den 10 juli 2020; kontroller kräver 2 redigeringar .Inom molekylärbiologi kallas omvänd transkriptionspolymeraskedjereaktion vanligen RT - PCR . RT-PCR är en metod för att amplifiera ett specifikt fragment av ribonukleinsyra ( RNA ). [ett]
En enkelsträngad RNA-molekyl omvandlas i en omvänd transkriptionsreaktion (RT, eng. RT, omvänd transkription ) till komplementärt DNA ( cDNA ) och sedan amplifieras den redan enkelsträngade DNA -molekylen med traditionell PCR . RT-PCR ska inte förväxlas med realtids -PCR ( Q -PCR ), som också ibland felaktigt förkortas till RT-PCR . [2]
Beskrivning av metoden
Omvänt transkriptas används för att omvandla en RNA-sekvens till komplementärt DNA :
- 1. Reaktion av den första kedjan: Komplementärt DNA ( cDNA ) bildas på en mRNA-mall från dNTP :er av enzymet omvänt transkriptas. Reaktionskomponenterna blandas med DNA- primer och omvänt transkriptasbuffert under en timme vid 37°C.
- 2. Reaktion av den andra kedjan: Efter att omvänd transkription är avslutad och cDNA bildas på mRNA-mallen, utförs nästa cykler enligt standard PCR-metoden .
Efter 30 cykler av amplifiering genereras miljontals kopior av den önskade sekvensen. [2]
Applikation
RT-PCR används för att detektera RNA-molekyler i ett prov med en känd sekvensregion som är komplementär till en primer. Exponentiell amplifiering med RT-PCR är en känslig teknik som kan detektera ett litet antal RNA-molekyler.
Ett exempel är RNA-virus som humant immunbristvirus (HIV), som är ett retrovirus och därför använder enzymet HIV -Reverse Transcriptase för att syntetisera viralt DNA, som sedan integreras i värdgenomet .
Dessutom används RT-PCR i stor utsträckning för diagnos av genetiska sjukdomar och semikvantitativ bestämning av specifika RNA-molekyler i en cell eller vävnad som en indikator på uttrycket av motsvarande gener [3] .
Se även
Anteckningar
- ↑ Hunt M. (2006) Handledning för PCR i realtid - Copyright 2006, Styrelsen för förtroendevalda vid University of South Carolina . Hämtad 20 oktober 2009. Arkiverad från originalet 4 oktober 2009.
- ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principer och tillämpning. - Moskva: Mir, 2002. - 589 sid. — ISBN 5030033289 .
- ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Absolut kvantifiering av mRNA med användning av omvänd transkriptionspolymeraskedjereaktionsanalyser i realtid . - 2000. - S. 169-193.
Litteratur
- Glick B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principer och tillämpning. - Moskva: Mir, 2002. - 589 sid. — ISBN 5030033289 .
 Ordböcker och uppslagsverk |
|---|