Konfokal mikroskopi

Den aktuella versionen av sidan har ännu inte granskats av erfarna bidragsgivare och kan skilja sig väsentligt från versionen som granskades den 26 juni 2016; kontroller kräver 58 redigeringar .

Konfokalmikroskopi (confocal laser scanning microscopy, CLSM ( engelsk  confocal laser scanning microscopy )) är en typ av ljusoptisk mikroskopi med signifikant kontrast och rumslig upplösning jämfört med klassisk ljusmikroskopi, som åstadkoms med hjälp av ett nålhål (nålhål) placerat i bildplanet och begränsar flödet av spridd bakgrundsljus som inte emitteras från linsens fokalplan [1] . Detta gör det möjligt att erhålla serier av bilder på olika djup av fokalplanet inuti provet (så kallad optisk sektionering av provet på djupet), och sedan rekonstruera en tredimensionell bild av provet från dessa serier. Konfokalmikroskopi har använts i stor utsträckning inom biologi, medicin, materialvetenskap och halvledarfysik.

Historik

Första prototyperna

1940 utvecklade Hans Goldmann, en ögonläkare i Bern, Schweiz, ett spaltlampssystem för att dokumentera ögonundersökningar [2] . Detta system anses av några senare författare som det första konfokala optiska systemet. [3] [4]

1943 publicerade Zun Koana det konfokala systemet. [3] År 1951 beskrev Hiroto Naora, en kollega till Koana, det konfokala mikroskopet i Science for spectrophotometry [5] .

På 1950-talet behövde biologer öka kontrasten på bilder av fluorokrommärkta föremål i tjocka vävnadssnitt [6] . För att lösa detta problem föreslog Marvin Minsky , professor vid Massachusetts Institute of Technology i USA, att använda ett konfokalt schema för fluorescensmikroskop. 1957 fick Minsky patent på detta system [7] .

Tandem scanning mikroskop

På 1960-talet utvecklade den tjeckoslovakiske forskaren Mojmir Petran, från medicinska fakulteten vid Charles University i Pilsen, Tandem Scanning Microscope, det första kommersiella konfokalmikroskopet som använde en roterande skiva - Nipkow -skivan  - för att skapa och lokalisera flera punktkällor för excitation och strålning. [8] [9]

Ett tjeckoslovakiskt patent lämnades in 1966 av Petran och hans kollega Milan Hadravsky. Den första vetenskapliga publikationen med data och bilder erhållna med detta mikroskop, av David Egger från Yale University och Mojmir Petran själv, publicerades i tidskriften Science 1967 [10] . En andra publikation 1968 beskriver instrumentets teori och tekniska detaljer [11] . 1970 patenterades uppfinningen i USA. [12]

Kombinera ett konfokalt mikroskop med en laserbelysning

1969 och 1971 forskarna David Egger och Paul Davidovich från Yale University publicerade banbrytande artiklar som beskrev det första konfokala laserskanningsmikroskopet [13] [14] Det var en punktskanner, det vill säga bara en punkt av belysning genererades. De använde epi-belysning i reflekterat ljus för att observera neural vävnad. En 5 mW helium-neonlaser med en våglängd på 633 nm användes som en källa för koherent strålning. Laserstrålen reflekterades av en halvtransparent spegel i riktning mot objektivet . Objektivet var ett enkelt objektiv med en brännvidd på 8,5 mm. Till skillnad från alla tidigare (och senare senare konstruktioner av konfokala system) skannades provet genom rörelsen av denna lins (objektiv scanning), vilket ledde till rörelsen av brännpunkten. Det reflekterade ljuset återfördes till en genomskinlig spegel, fokuserad av en annan lins på ett diafragma ( nålhål ), bakom vilket placerades ett fotomultiplikatorrör . Signalen visualiserades med ett CRT -oscilloskop , katodstrålen rörde sig samtidigt med linsen. Med hjälp av en speciell adapter gick det att fota på en polaroidkamera. Tre av fotografierna som erhållits på detta sätt publicerades i en tidning från 1971 [14] .

Systemen för Marvin Minskys konfokala avsökningsmikroskop som använder laserstrålning har också utvecklats [15] . I framtiden riktades forskarnas huvudsakliga uppmärksamhet mot analysen av användningen av fluorescerande färgämnen för in vivo-studier och förbättringen av kvaliteten på konfokala bilder genom att öka intensiteten av fluorescerande strålning.

Utveckling av skanningssystem

1977 publicerade Colin J. R. Sheppard och Amargioti Chowdhury en teoretisk analys av konfokala mikroskop och laserskanningsmikroskop. [16] Detta var förmodligen den första vetenskapliga publikationen som använde termen "konfokalmikroskop". [17] År 1978 publicerade Christoph Kremer och Thomas Kremer en design för ett konfokalt laseravsökningsmikroskop som använder fluorescerande excitation med elektronisk autofokus. [18] Denna CLSM-modell var den första som kombinerade laserskanning med volymetrisk detektering av biologiska föremål märkta med fluorescerande markörer. 1978 och 1980 beskrev Oxford-gruppen av Colin Sheppard och Tony Wilson ett konfokalt system med epi-laserbelysning, ett skanningssteg och fotomultiplikatorer som detektorer. Bordet kunde röra sig längs den optiska axeln, vilket gjorde det möjligt att utföra tredimensionell optisk skikt-för-skikt-sektionering [17] . 1979 visade Fred Brackenhoff och kollegor att de teoretiska fördelarna med optisk sektionering och förbättrad optisk upplösning verkligen var möjliga i praktiken. [19] 1983 publicerade I. Cox och S. Sheppard det första verket där ett konfokalmikroskop styrdes av en persondator. [tjugo]

Punktskanning med laserstråle

I mitten av 1980-talet byggde William Bradshaw Amos och John Gralham White och kollegor vid Molecular Biology Laboratory i Cambridge det första konfokala laserskanningsmikroskopet. [21] [22] I hans optiska schema utfördes skanning genom att sekventiellt flytta ljusstrålen över provet, och inte genom att flytta provbordet. Detta schema gjorde det möjligt att avsevärt öka skanningshastigheten på grund av avvisandet av tröghetsmekaniska skanningssystem och uppnå en hastighet på upp till fyra bilder per sekund (512 linjer i varje). [21]

Samtidigt sponsrade UK Medical Research Council (MRC) utvecklingen av en prototyp av ett modernt kommersiellt konfokalmikroskop, som senare förvärvades av Bio-Rad, datorstyrt och kommersialiserat som "MRC 500". Efterföljaren till MRC 600 blev senare grunden för utvecklingen av det första tvåfotonfluorescensmikroskopet, utvecklat 1990 vid Cornell University. [19]

Forskning bedriven vid Stockholms universitet ungefär samtidigt förvandlades också till det kommersiella CLSM Sarastro. [23]

Företaget förvärvades 1990 av Molecular Dynamics [24] , men vidareutvecklingen av systemet övergavs så småningom.

1989 uppfann Fritz Karl och Eckhard Praikschat det skanande laserdiodmikroskopet för partikelstorleksanalys. [25] [26]

I Tyskland utvecklade Heidelberg Instruments, grundat 1984, CLSM-teknik, som ursprungligen var avsedd för industriella tillämpningar, inte biologi. I början av 1990-talet utvecklades denna teknik aktivt av Leica Lasertechnik och Carl Zeiss , som vid den tiden redan framgångsrikt producerade ljusmikroskop med ett implementerat laserstrålescanningsschema, som senare uppgraderades till konfokala system [27] .

Hur det fungerar

Det optiska schemat för ett konventionellt ljusmikroskop bildar en bild av hela den del av provet som ligger i skärpedjupet för det använda mikroobjektet, och det konfokala mikroskopet bildar en bild av en mycket tunn sektion av objektet på samma djupnivå. I huvudsak uppnås CLSM-metoden genom att styra det optiska systemets fokusdjup.

Principen för konfokal avbildning patenterades 1957 av Marvin Minsky [28] [29] och syftar till att övervinna några av begränsningarna hos traditionella fluorescensmikroskop. I ett konventionellt (bredfälts) fluorescerande mikroskop belyses hela provet jämnt av mikroskopets strålningskälla. I detta fall bestrålas och exciteras hela provet samtidigt, och den resulterande fluorescensen detekteras med hjälp av en fotodetektor eller mikroskopkamera, inklusive en stor bakgrundsdel av objektet. Däremot använder ett konfokalmikroskop en spotlight (se punktspridningsfunktion ) och ett nålhål i det optiska konjugerade planet framför detektorn för att eliminera oskärpa signaler. Således detekteras fluorescerande strålning endast från fokalplanet, så den optiska upplösningen av bilden, särskilt längs Z-axeln (längs provets djup), är mycket högre än för konventionella ljusmikroskop. Men eftersom det mesta av fluorescensen från provet är blockerad, åtföljs en ökning av upplösningen av en minskning av intensiteten hos den användbara signalen. För att kompensera för denna bieffekt används en längre detektorexponering och mycket känsliga fotodetektorer, vanligtvis en PMT eller en lavinfotodiod , som omvandlar den optiska signalen till en elektrisk, följt av registrering på en persondator [30] .

Eftersom endast en fluorescerande prick registreras på provet, krävs en rasterskanning av provet för att bilda en 2D- eller 3D-bild. Laserstrålen rör sig längs provet i ett horisontellt plan med hjälp av en eller flera speglar med en kontrollerad lutningsvinkel. Denna skanningsmetod har vanligtvis en låg skanningshastighet, som dock kan variera. Till exempel ger långsammare skanning ett bättre signal-brusförhållande, vilket resulterar i bättre kontrast och högre upplösning.

Som bekant är skärpedjupet för CLSM direkt proportionellt mot våglängden för den använda strålningen och omvänt proportionell mot mikroobjektivets numeriska apertur, och beror också på provets optiska egenskaper. På grund av detta sker mjukvarurekonstruktion av en punkt av 3D-objekt i CLSM med hjälp av olika algoritmer. Det vanligaste är algoritmen för att söka efter maximal intensitet. [31]

Ett konfokalt mikroskop har samma upplösning som ett konventionellt mikroskop och begränsas av diffraktionsgränsen .

där  är strålningens våglängd,  är objektivets numeriska apertur,  är brytningsindexet för mediet mellan provet och objektivet,  är halva vinkeln som objektivet "fångar". I det synliga området är upplösningen ~ 250 nm (NA=1,45, n=1,51), men på senare år har mikroskopdesigner framgångsrikt utvecklats som använder de olinjära egenskaperna hos provernas fluorescens. I detta fall uppnås en upplösning som är mycket mindre än diffraktionsgränsen och uppgår till ~3–10 nm [32] [33] [34] [35] .

Låt oss nu överväga frågan om att öka kontrasten när du använder ett konfokalt optiskt schema. För det första, eftersom ljus passerar genom linsen två gånger i ett konfokalmikroskop, har punktoskärpafunktionen (nedan kallad PSF ) följande form:

,

där Pconf är funktionen för konfokalpunktsoskärpa och p är den vanliga punktoskärpafunktionen.

Sålunda bestäms den uppnåbara tjockleken hos fokalplanet huvudsakligen av våglängden för den använda strålningen dividerat med objektivets numeriska apertur, och beror också på provets optiska egenskaper. På grund av sin tunna optiska sektion är dessa typer av mikroskop särskilt bra för 3D-avbildning och ytprofilering av prover.

Sekventiella skivor bildar en "z-stack" som kan bearbetas av viss programvara för att skapa en 3D-renderad bild, eller presenteras i en 2D-stack för publicering, tack vare en gemensam sökalgoritm för maximal intensitet. [31]

Konfokalmikroskopi ger direkt, icke-invasiv sekventiell optisk sektionering av intakta tjocka levande prover med minimala förberedelsekrav, såväl som högre lateral upplösning jämfört med konventionell ljusmikroskopi [36] [37] . Vanligtvis är biologiska prover motfärgade med fluorescerande färgämnen för att visualisera deras specifika regioner eller organeller. Den faktiska färgämneskoncentrationen kan dock hållas mycket låg för att minimera påverkan på biologiska system. Således kan vissa konfokala system spåra individuella fluorescerande molekyler [38] . Dessutom kan transgena teknologier skapa organismer som producerar sina egna fluorescerande chimära molekyler (märkta med GFP, grönt fluorescerande protein) [39] .

Ett konfokalt laserskanningsmikroskop med hög kontrast ger två ovärderliga möjligheter: det låter dig undersöka vävnader på cellnivå i ett tillstånd av fysiologisk vitalitet, samt utvärdera resultaten (dynamiken) av cellulär aktivitet i fyra dimensioner - höjd, bredd, djup och tid. [40]

Rumslig upplösning i konfokalmikroskopi

Genom att tillämpa Rayleigh-kriteriet för upplösning (dopp 26% av fördelningsmaximum) finner vi att upplösningen i det konfokala mikroskopet ökar, men inte signifikant. För ett konfokalmikroskop definieras upplösningen (rc) enligt följande [ 8] [41] [1] :

,

där n är det relativa brytningsindexet, D är diametern på det optiska systemets ingångspupill, λ är våglängden, F är mikroobjektivets brännvidd, θ är öppningsvinkeln för mikroobjektivet, λ'=λ/n . För ett konventionellt ljusmikroskop, upplösning (r r ):

Den största fördelen med ett konfokalmikroskop är dock inte en ökning av upplösningen enligt Rayleigh-kriteriet, utan en signifikant ökning av kontrasten. Speciellt för en konventionell PSF i fokalplanet är förhållandet mellan amplituden i det första laterala maximumet och amplituden för det huvudsakliga maximumet 2%; för ett konfokalmikroskop kommer detta förhållande att vara 0,04%.

Konfokalmikroskopi ger en ökning av bildkontrasten genom användning av fokuserad belysning (excitation) i analysområdet och fluorescensbländare i bildplanet. Denna kontrastökning resulterar i möjligheten att lösa objekt med en intensitetsskillnad på upp till 200:1 och ger även en ökning av upplösningen, både i objektplanet och längs den optiska axeln. Tillsammans med att öka kontrasten gör fluorescerande konfokalmikroskopi det möjligt att tillhandahålla en steg-för-steg tredimensionell rekonstruktion av föremålet som studeras genom användning av flerpunktsbelysning. Bland de mest avancerade metoderna för skanningskonfokalmikroskopi bör användningen av en skanningsskiva med mikromembran och användningen av matrisfotodetektorer [2] lyftas fram .

Idag finns det metoder som avsevärt kan öka upplösningen i ett konfokalmikroskop. I ett konventionellt konfokalmikroskop fokuseras excitationsljuset till en enda punkt på provet, följt av detektering av en emissionsfluorescerande signal. Ofokuserad emissionsstrålning skärs av av ett nålhål (nålhål) vars storlek bestämmer hur många maxima av Airy-skivan som kommer att nå detektorn. En ökning av upplösningen kan uppnås genom att minska diametern på membranet (nålhålet), men signal-brusförhållandet kommer att minska avsevärt på grund av en minskning av intensiteten av emissionsstrålningen som passerar genom membranet. Ett alternativ till sådan skanning är användningen av arraydetektorer [42] [43] , som samtidigt registrerar intensitetsfördelningen längs provets laterala plan samtidigt från hela området av Airy-skivan, där varje fotokänsligt element fungerar som ett nålhålsöppning. Genom att använda detekteringsalgoritmen med en 32-kanals matrisdetektor (Airyscan [44] [45] ), visades det att det är möjligt att överskrida den klassiska upplösningsgränsen (diffraktionsgränsen) med mer än 1,7 gånger i alla tre dimensionerna: upp till 140 nm lateralt och 400 nm axiellt vid en våglängd av 488 nm [46] [47] [48] [49] [50] [51] [52] .

Applikation

CLSM används i stor utsträckning inom nästan alla grenar av biologin, från cellbiologi och genetik till mikrobiologi och utvecklingsbiologi. Det används också inom kvantoptik och nanokristallin avbildning och spektroskopi.

Biologi och medicin

Kliniskt används CLSM för att undersöka olika ögonsjukdomar, och speciellt för avbildning, kvalitativ analys och kvantifiering av hornhinneendotelceller [53] . Det används för att lokalisera och identifiera förekomsten av filamentösa svampfilament i hornhinnans stroma i fall av keratomycosis, vilket möjliggör snabb diagnos och tidig administrering av korrekt behandling. Det verkar också lovande att utföra endoskopiska ingrepp ( endomikroskopi ) med CLSM-metoden [54] . Inom läkemedelsindustrin rekommenderades det att använda detta tillvägagångssätt för att övervaka produktionsprocessen av tunnfilmsläkemedelsformer, för att kontrollera kvaliteten och enhetligheten i distributionen av medicinska substanser.

Optik och kristallografi

CLSM används som en dataåterställningsmekanism i vissa 3D-optiska datalagringssystem eller kartläggning av kemiska föreningar, såväl som i halvledarfysik och spintronik (särskilt i studien av egenskaperna hos NV-centra ). [55] [56] .

Ett exempel på bilder erhållna med CLSM-metoden

Se även

Anteckningar

  1. ↑ Handbook of Biological Confocal Microscopy  / JB Pawley. — 3:e uppl. - Berlin : Springer, 2006. - 985 sid. — ISBN 0-387-25921-X . - doi : 10.1007/978-0-387-45524-2 .
  2. ↑ Hans Goldmann (1939) - Google Academy . scholar.google.ru. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 22 juni 2019.
  3. ↑ 1 2 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. Konfokalmikroskopi | Avbildning och mikroskopi - Forskning, utveckling,  produktion . www.imaging-git.com Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 2 augusti 2017.
  4. ↑ Barry R. Mästare. Konfokalmikroskopi och multifotonexcitationsmikroskopi: The Genesis of Live Cell Imaging . - SPIE Press, 2006-01-01. — 234 sid. — ISBN 9780819461186 . Arkiverad 22 oktober 2018 på Wayback Machine
  5. ↑ Hiroto Naora. Mikrospektrofotometri i synligt ljusområde . — 1958-01-01. — bok s. Arkiverad 22 juni 2019 på Wayback Machine
  6. ↑ Konfokal mikroskopi . Hämtad 9 april 2010. Arkiverad från originalet 24 september 2015.
  7. ↑ US 3013467
  8. ↑ 12 Robert H. Webb . Konfokal optisk mikroskopi (engelska)  // Reports on Progress in Physics. - 1996-01-01. — Vol. 59 , iss. 3 . - S. 427 . — ISSN 0034-4885 . - doi : 10.1088/0034-4885/59/3/003 .  
  9. ↑ Guy Cox. Optical Imaging Techniques in Cell Biology, andra upplagan . — CRC Press, 2012-06-04. — 319 sid. — ISBN 9781439848258 .
  10. ↑ M. David Egger, Mojmir Petran. Nytt reflekterat ljusmikroskop för visning av ofärgade hjärn- och ganglieceller   // Vetenskap . - 1967-07-21. — Vol. 157 , iss. 3786 . - s. 305-307 . — ISSN 1095-9203 0036-8075, 1095-9203 . - doi : 10.1126/science.157.3786.305 . Arkiverad från originalet den 7 oktober 2017.
  11. ↑ Mojmír Petráň, Milan Hadravský, M. David Egger, Robert Galambos. Tandem-scanning reflekterat ljusmikroskop* (EN) // JOSA. - 1968-05-01. - T. 58 , nej. 5 . - S. 661-664 . - doi : 10.1364/JOSA.58.000661 .
  12. ↑ Metod och arrangemang för att förbättra upplösningsförmågan och kontrasten . Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 14 november 2016.
  13. ↑ M.D. Egger, W. Gezari, P. Davidovits, M. Hadravský, M. Petráň. Observation av nervfibrer i infallande ljus  (engelska)  // Experientia. — 1969-11-01. — Vol. 25 , iss. 11 . - P. 1225-1226 . - ISSN 1420-9071 0014-4754, 1420-9071 . - doi : 10.1007/BF01900292 . Arkiverad från originalet den 6 juni 2018.
  14. ↑ 1 2 P. Davidovits, M. D. Egger. Scanning Laser Microscope for Biological Investigations (EN) // Tillämpad optik. — 1971-07-01. - T. 10 , nej. 7 . - S. 1615-1619 . — ISSN 1539-4522 . - doi : 10.1364/AO.10.001615 .
  15. ↑ Barry R. Mästare. Konfokalmikroskopi och multifotonexcitationsmikroskopi: The Genesis of Live Cell Imaging . - SPIE Press, 2006-01-01. — 234 sid. — ISBN 9780819461186 . Arkiverad 22 oktober 2018 på Wayback Machine
  16. ↑ CJR Sheppard, A. Choudhury. Bildbildning i svepmikroskopet  // Optica Acta: International Journal of Optics. — 1977-10-01. - T. 24 , nej. 10 . - S. 1051-1073 . — ISSN 0030-3909 . doi : 10.1080 / 713819421 .
  17. ↑ 1 2 Shinya Inoue. Grunderna för konfokal skannad avbildning i ljusmikroskopi  (engelska)  // Handbook Of Biological Confocal Microscopy / James B. Pawley. — Springer USA, 2006-01-01. - S. 1-19 . - ISBN 9780387259215 , 9780387455242 . - doi : 10.1007/978-0-387-45524-2_1 . Arkiverad från originalet den 12 juni 2018.
  18. ↑ C. Cremer, T. Cremer. Överväganden om ett laser-scanning-mikroskop med hög upplösning och skärpedjup  // Microscopica Acta. — 1978-09-01. - T. 81 , nej. 1 . - S. 31-44 . - ISSN 0044-376X . Arkiverad från originalet den 22 oktober 2018.
  19. ↑ 1 2 W. B. Amos, J. G. White. Hur det konfokala laserskanningsmikroskopet kom in i biologisk forskning  // Biology of the Cell. - 2003-09-01. - T. 95 , nej. 6 . - S. 335-342 . — ISSN 0248-4900 . Arkiverad från originalet den 22 oktober 2018.
  20. ↑ Digital bildbehandling av konfokala bilder - ScienceDirect  . www.sciencedirect.com. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 22 april 2019.
  21. ↑ 1 2 J. G. White, W. B. Amos, M. Fordham. En utvärdering av konfokal kontra konventionell avbildning av biologiska strukturer genom fluorescensljusmikroskopi  // The Journal of Cell Biology. - 1987-07-01. - T. 105 , nej. 1 . - S. 41-48 . — ISSN 0021-9525 . Arkiverad från originalet den 9 januari 2018.
  22. ↑ John  White . royalsociety.org. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 17 november 2015.
  23. ↑ Detektion av ras-onkoprotein i leverceller hos plattfisk (Dab) från en förorenad plats i Nordsjön - ScienceDirect  . www.sciencedirect.com. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 22 april 2019.
  24. ↑ Bild är allt | The Scientist Magazine . Vetenskapsmannen. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 30 maj 2016.
  25. ↑ Apparat och metod för partikelanalys . Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 21 mars 2017.
  26. ↑ Apparat och metod för partikelanalys . Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 23 november 2016.
  27. ↑ Konfokalmikroskop vidgar cellbiologi Karriärhorisonter | The Scientist Magazine . Vetenskapsmannen. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 30 maj 2016.
  28. ↑ Espacenet - Bibliografiska  data . worldwide.espacenet.com. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 29 mars 2017.
  29. ↑ Marvin Minsky, . web.media.mit.edu. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 22 december 2017.
  30. ↑ Olympus Microscopy Resource Center . olympus.magnet.fsu.edu. Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 19 maj 2017.
  31. ↑ 12 James Pawley . Handbok för biologisk konfokalmikroskopi . — Springer Science & Business Media, 2006-06-02. — 1018 sid. — ISBN 9780387259215 . Arkiverad 22 oktober 2018 på Wayback Machine
  32. ↑ Stefan W. Hell. Far-Field Optical Nanoscopy  (neopr.)  // SCIENCE. - 2007. - T. 316 . - S. 1153-1158 . - doi : 10.1126/science.1137395 .
  33. ↑ Kelly Rae Chi. Mikroskopi: Ständigt ökande upplösning   // Nature . — 2009-12-03. — Vol. 462 , utg. 7273 . - s. 675-678 . — ISSN 0028-0836 . - doi : 10.1038/462675a . Arkiverad från originalet den 9 mars 2010.
  34. ↑ Mariella Vicinanza, Viktor I. Korolchuk, Avraham Ashkenazi, Claudia Puri, Fiona M. Menzies. PI(5)P Reglerar autofagosomes biogenes  //  Molecular Cell. — 2015-01-22. — Vol. 57 , iss. 2 . - S. 219-234 . — ISSN 1097-2765 . - doi : 10.1016/j.molcel.2014.12.007 .
  35. ↑ Laurens Liesenborghs, Marijke Peetermans, Jorien Claes, Tiago Rafael Veloso, Christophe Vandenbriele. Skjuvbeständig bindning till von Willebrand-faktorn tillåter Staphylococcus lugdunensisto att fästa vid hjärtklaffarna och initiera endokardit  //  Journal of Infectious Diseases. — 2016-04-01. — Vol. 213 , utg. 7 . - P. 1148-1156 . — ISSN 0022-1899 . - doi : 10.1093/infdis/jiv773 .
  36. ↑ Väteperoxid och cellsignalering . — Academic Press, 2013-06-19. — 343 sid. — ISBN 9780124055421 . Arkiverad 22 oktober 2018 på Wayback Machine
  37. ↑ Richard W. Cole, Tushare Jinadasa, Claire M. Brown. Mätning och tolkning av punktspridningsfunktioner för att bestämma konfokalmikroskopupplösning och säkerställa kvalitetskontroll  //  Nature Protocols. — 2011-12-01. — Vol. 6 , iss. 12 . - P. 1929-1941 . — ISSN 1754-2189 . - doi : 10.1038/nprot.2011.407 . Arkiverad från originalet den 7 maj 2017.
  38. ↑ Gerald Burgstaller, Bettina Oehrle, Ina Koch, Michael Lindner, Oliver Eickelberg. Multiplex profilering av cellulär invasion i 3D-cellkulturmodeller  // PLOS One  . - Public Library of Science , 2013-05-09. — Vol. 8 , iss. 5 . — P.e63121 . — ISSN 1932-6203 . - doi : 10.1371/journal.pone.0063121 . Arkiverad från originalet den 11 februari 2021.
  39. ↑ Josephine Walter, Silke Keiner, Otto W. Witte, Christoph Redecker. Åldersrelaterade effekter på subpopulationer av hippocampus prekursorceller och neurogenes  // Neurobiology of Aging. — 2011-10-01. - T. 32 , nej. 10 . - S. 1906-1914 . - doi : 10.1016/j.neurobiolaging.2009.11.011 . Arkiverad från originalet den 22 april 2019.
  40. ↑ SP Utrustning "Laboratorieutrustning" Olympus optisk mikroskopi "Mikroskop för medicin och biologi" Konfokalmikroskop "Olympus FV300 konfokalmikroskop (ej tillgänglig länk) . Tillträdesdatum: 2 oktober 2009. Arkiverad 16 oktober 2007. 
  41. ↑ Gordon S. Kino, Timothy R. Corle. Konfokal scanning optisk mikroskopi och relaterade bildbehandlingssystem . - Academic Press, 1996-09-18. — 353 sid. — ISBN 9780080529783 . Arkiverad 22 oktober 2018 på Wayback Machine
  42. ↑ Patricia Sheehan, Mei Zhu, Anne Beskow, Cyndel Vollmer, Clarissa L. Waites. Aktivitetsberoende nedbrytning av synaptiska vesikelproteiner kräver Rab35 och ESCRT Pathway  //  Journal of Neuroscience. — 2016-08-17. — Vol. 36 , iss. 33 . - P. 8668-8686 . — ISSN 1529-2401 0270-6474, 1529-2401 . - doi : 10.1523/JNEUROSCI.0725-16.2016 . Arkiverad från originalet den 22 september 2017.
  43. ↑ Mo Zhou, Heidi Wiener, Wenjuan Su, Yong Zhou, Caroline Liot. VPS35 binder farnesylerade N-Ras i cytosolen för att reglera N-Ras trafficking  //  J Cell Biol. — 2016-08-02. — P.jcb.201604061 . - ISSN 1540-8140 0021-9525, 1540-8140 . - doi : 10.1083/jcb.201604061 . Arkiverad från originalet den 22 oktober 2018.
  44. ↑ Joseph Huff. Airyscan-detektorn från ZEISS: konfokal bildbehandling med förbättrat signal-brusförhållande och superupplösning  //  Nature Methods. — 2015-12-01. — Vol. 12 , iss. 12 . — ISSN 1548-7091 . - doi : 10.1038/nmeth.f.388 . Arkiverad från originalet den 13 oktober 2016.
  45. ↑ Mayandi Sivaguru, Michael A. Urban, Glenn Fried, Cassandra J. Wesseln, Luke Mander. Jämförande prestanda för airyscan och strukturerad belysning superupplösningsmikroskopi i studien av ytstrukturen och 3D-formen av pollen  // Mikroskopiforskning och teknik. - doi : 10.1002/jemt.22732 .
  46. ↑ SGB Furness, DL Hare, A Kourakis, AM Turnley, PJ Wookey. En ny ligand av kalcitoninreceptor avslöjar en potentiell ny sensor som modulerar programmerad celldöd  // Cell Death Discovery. — 2016-10-10. - T. 2 . - S. 16062 . — ISSN 2058-7716 . - doi : 10.1038/cddiscovery.2016.62 . Arkiverad från originalet den 14 oktober 2021.
  47. ↑ Patrick Robison, Matthew A. Caporizzo, Hossein Ahmadzadeh, Alexey I. Bogush, Christina Yingxian Chen. Detyrosinerade mikrotubuli spänns fast och bär belastning i sammandragande kardiomyocyter   // Vetenskap . — 2016-04-22. — Vol. 352 , utg. 6284 . —P.aaf0659 . _ — ISSN 1095-9203 0036-8075, 1095-9203 . - doi : 10.1126/science.aaf0659 . Arkiverad från originalet den 13 juni 2017.
  48. ↑ Enrique Sosa, Rachel Kim, Ernesto J. Rojas, Linzi Hosohama, Jon D. Hennebold. En integrationsfri, virusfri rhesus macaque-inducerad pluripotent stamcellinje (riPSC89) från embryonala fibroblaster  // Stamcellsforskning. — 2016-09-01. - T. 17 , nej. 2 . - S. 444-447 . - doi : 10.1016/j.scr.2016.09.015 . Arkiverad från originalet den 22 april 2019.
  49. ↑ Joanne Bruno, Alexandria Brumfield, Natasha Chaudhary, David Iaea, Timothy E. McGraw. SEC16A är en RAB10-effektor som krävs för insulinstimulerad GLUT4-trafik i adipocyter  //  J Cell Biol. — 2016-06-21. — P.jcb.201509052 . - ISSN 1540-8140 0021-9525, 1540-8140 . - doi : 10.1083/jcb.201509052 . Arkiverad från originalet den 22 oktober 2018.
  50. ↑ HoJun Jeon, JaeYoon Lee, Hyeongjin Lee, Geun Hyung Kim. Nanostrukturerad yta av elektrospunnen PCL/dECM-fibrer behandlade med syreplasma för vävnadsteknik  (engelska)  // RSC Advances. — 2016-03-31. — Vol. 6 , iss. 39 . — ISSN 2046-2069 . - doi : 10.1039/C6RA03840A . Arkiverad från originalet den 22 oktober 2018.
  51. ↑ Emily Breeze, Natasha Dzimitrowicz, Verena Kriechbaumer, Rhiannon Brooks, Stanley W. Botchway. En C-terminal amfipatisk helix är nödvändig för den tubuliformande funktionen in vivo hos ett växtretikulon  // Proceedings of the National Academy of Sciences  . - National Academy of Sciences , 2016-09-27. — Vol. 113 , iss. 39 . - P. 10902-10907 . - ISSN 1091-6490 0027-8424, 1091-6490 . - doi : 10.1073/pnas.1605434113 . Arkiverad från originalet den 1 juni 2018.
  52. ↑ Felipe Mora-Bermúdez, Farhath Badsha, Sabina Kanton, J. Gray Camp, Benjamin Vernot. Skillnader och likheter mellan mänskliga och schimpansers neurala stamfader under utveckling av hjärnbarken   // eLife . — 2016-09-26. — Vol. 5 . —P.e18683 . _ — ISSN 2050-084X . - doi : 10.7554/eLife.18683 .
  53. ↑ Dipika V. Patel, Charles NJ McGhee. Samtida in vivo konfokalmikroskopi av den levande mänskliga hornhinnan med hjälp av vitt ljus och laserskanningstekniker: en stor recension  // Klinisk och experimentell oftalmologi. - 2007-01-01. - T. 35 , nej. 1 . - S. 71-88 . — ISSN 1442-6404 . - doi : 10.1111/j.1442-9071.2007.01423.x . Arkiverad från originalet den 5 mars 2016.
  54. ↑ A. Hoffman, M. Goetz, M. Vieth, P. Galle, M. Neurath. Konfokal laserendomikroskopi: teknisk status och aktuella indikationer   // Endoskopi . — Vol. 38 , iss. 12 . - P. 1275-1283 . - doi : 10.1055/s-2006-944813 . Arkiverad 7 maj 2019.
  55. ↑ Fotonik - Vetenskaplig och teknisk tidskrift - Fotonik - Kemisk kartläggning Visualisering: Konfokal Raman-mikroskopi . www.photonics.su Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 26 augusti 2018.
  56. ↑ ROBERT BELLINGER, OLYMPUS SCIENTIFIC SOLUTIONS AMERICAS INC. Laserkonfokalmikroskopi: Utmana gränserna för att mäta ytråhet . Hämtad 11 maj 2017. Arkiverad från originalet 20 april 2017.

Länkar

  Gå till Wikidata-objektet  Ordböcker och uppslagsverk
I bibliografiska kataloger