Trombingenereringstestet är en integrerad indikator på blodkoagulationssystemets tillstånd .
Trombin är huvudenzymet i blodkoagulationssystemet. Det katalyserar huvudreaktionen i detta system, omvandlingen av fibrinogen till fibrin . Dessutom är det trombin som utför huvudregleringen av systemet, aktiverande koagulationsfaktorer V, VIII, VII, XI, XIII, protein C, blodplättar , trombinaktiverad fibrinolyshämmare. Slutligen (vilket är viktigt ur praktisk synvinkel) bildas mer trombin under koagulationen (10–100 gånger) än alla andra koagulationsserinproteaser tillsammans. Studiet av trombins kinetik kan ge mycket ytterligare information som inte är tillgänglig från en enkel observation av kinetiken för koagulering. Fibrinklumpen är bara slutresultatet av koaguleringsprocessen; det är viktigt att observera det, men för att förstå processens mekanismer är det nödvändigt att titta djupare.
Metoder för att övervaka koncentrationen av trombin dök upp för ganska länge sedan: redan på 1960-talet utfördes studier av kinetiken för trombinbildning mycket aktivt. Den klassiska metoden för att bestämma trombinkoncentrationen var koagulering: ett prov med en okänd trombinkoncentration blandades med icke-återkalkad plasma (som i trombintidstestet) och trombinkoncentrationen bestämdes från koaguleringstiden. För att plotta kurvan för trombinkoncentrationen mot tiden togs prover med korta tidsintervall. Mätningen av en enda kurva krävde ett koordinerat arbete av två högt kvalificerade laboratorieassistenter under en timme, och den breda kliniska tillämpningen av metoden var otänkbar.
Tillkomsten av kromogena och sedan fluorogena substrat på 1980-talet revolutionerade studiet av blodkoagulation [1] , [2] . Ett sådant syntetiskt substrat är en molekyl som känns igen och skärs av serinproteinas . Detta snitt leder till klyvning av signalmolekylen, märkningen, från substratet. Märkningen ändrar antingen lösningens optiska densitet (kromogent, d.v.s. färgande substrat) eller kan fluorescera när den är belyst (fluorogent substrat). Trombinsubstrat kunde tillsättas direkt till plasmat och koaguleringssignalen kunde registreras. Hastigheten för signalökningen är då proportionell mot trombinkoncentrationen, så att tidsberoendet för trombin erhålls från den experimentella kurvan genom enkel differentiering och normalisering till standardkurvan. Tidiga kromogena substrat var inte särskilt lämpliga för att mäta trombingenerering, eftersom de krävde plasmadefibrinering; annars störde uppkomsten av koagel observationen av utseendet av den färgande molekylen. Men fluorogena substrat, som vid skärning gav en starkt lysande märkning, gjorde det möjligt att mäta genereringen av trombin direkt i vanlig plasma. Ökningen av produktiviteten var enorm: istället för att två personer mätte samma kurva under en hel timme kunde en person ladda plattan med prover, lägga dem i plattfluorimetern och på en timme få data om flera dussin prover.
Sedan 1990-talet har en ny metod för trombingenerering aktivt använts på kliniken. Detta tillvägagångssätt, som utvecklats och utvecklats av Konrad Hemker i Nederländerna, används i allt större utsträckning i Europa varje år, och på senare år har det också blivit tillgängligt nästan över hela världen, inklusive Ryssland. En översikt över denna metod på ryska av dess skapare finns i [3] . En karakteristisk trombingenereringskurva visas i [1] .
Som regel särskiljs två huvudparametrar i den: fördröjningstid (koagulationsfördröjningstid) och endogen trombinpotential (area under trombingenereringskurvan). Många experiment och tester har visat att dessa två parametrar är effektiva indikatorer på patologiska processer.
Liksom vid tromboelastografi är resultaten av trombingenereringstestet markant beroende av de experimentella förhållandena: aktiveringsmetoden, koncentrationen av aktivatorn, användningen av blodplättsfattig eller rik plasma, tillsats av hjälpämnen. Genom att ändra dessa parametrar är det möjligt att upptäcka en mängd olika koagulationsrubbningar. Standardaktivering med en liten mängd vävnadsfaktor i dålig plasma används för att upptäcka abnormiteter i plasmakoagulation [4] . Det är bekvämt för massanalys av prover, särskilt när de behöver transporteras eller frysas. Trombingenerering i rik plasma kan dessutom upptäcka blodplättskoagulationsstörningar, framgångsrikt upptäcka en tendens till blödning vid Glanzmann-trombasteni, Bernard-Souliers syndrom, ta blodplättsdämpande läkemedel [5] . Om trombomodulin läggs till plasman börjar detta test till och med upptäcka vissa hyperkoagulerbara störningar: koagulationsfaktor V Leiden-mutationen, konsekvenserna av att ta orala preventivmedel och andra [6] .