Terapeutisk angiogenes

Terapeutisk angiogenes (även kallad biologisk shunting ) är en taktik för att stimulera bildandet av nya blodkärl för behandling eller förebyggande av patologiska tillstånd som kännetecknas av en minskning av denna funktion [1] .

Omfattning

Behovet av terapeutisk angiogenes är koncentrerat till området för distala former av kronisk nedre extremitetsischemi ( CLLI), kranskärlssjukdom , hjärtinfarkt , där kirurgiska behandlingsmetoder antingen är omöjliga eller inte tillräckligt effektiva, förknippade med en hög frekvens av kontraindikationer och komplikationer [2] [3] .

Historien om terapeutisk angiogenes

Begreppet terapeutisk angiogenes började utvecklas efter arbete av J. Folkman , som utvecklade en teori om utveckling och upprätthållande av adekvat blodtillförsel med hjälp av angiogena tillväxtfaktorer i tumörvävnader.
Efter identifieringen av blodkärlstillväxtfaktorer började forskare testa hypoteser om stimulering av angiogenes vid behandling av ischemiska tillstånd. För första gången i klinisk praxis användes terapeutisk angiogenes av J. Isner. 1994 introducerades en 71-årig patient i ett allvarligt tillstånd med kritisk nedre extremitetsischemi (CLLI), grad IV enligt klassificeringen av A.V. Pokrovsky-Fontein, VEGF-165-genen i en plasmidvektor [4] [ 5] .
Nästa kliniska utredare var I. Baumgartner, som genomförde ett antal studier på patienter med CLLI, beskrev och klassificerade möjliga biverkningar [6] .

Mekanism för terapeutisk angiogenes

Konventionellt finns det två processer som ligger bakom terapeutisk angiogenes: angiogenes och vaskulogenes [7] .
Vaskulogenes är processen för in situ-bildning av blodkärl från endotelceller (EPC), som migrerar och smälter samman med andra endotelceller till kapillärer och differentierar till endotelceller för att bilda nya kärl. Denna form är vanligast under embryonalperioden [8] .
Angiogenes inkluderar förlängning av redan bildade kärl och är en process för spirande av nya kapillärer, inklusive aktivering av endotelceller, nedbrytning av den extracellulära matrisen, proliferation och migration av endoteliocyter, och bildandet av primära mycket permeabla vaskulära strukturer. Därefter sker stabilisering och "uppväxt" av de primära vaskulära strukturerna på grund av rekryteringen av celler av en annan typ: pericyter och glatta muskelceller, vilket resulterar i organiseringen av ett komplext tredimensionellt vaskulärt nätverk [8] .
Den huvudsakliga stimulerande faktorn för angiogenes under fysiologiska och patologiska tillstånd är bristen på syre. Hypoxi stimulerar bildandet av de flesta angiogena faktorer, och framför allt den viktigaste regulatorn av angiogenes både i de embryonala och postnatala utvecklingsperioderna av kroppen - vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF) och dess receptorer (VEGF-R). Mer än 20 faktorer har identifierats som stimulerar eller hämmar angiogenesprocessen (tabell 1). Vissa faktorer, beroende på dosen, kan vara både inducerare av angiogenes och inhibitorer [9] [10] . För närvarande inkluderar termen "terapeutisk angiogenes" båda de processer som beskrivs ovan för tillväxt av nya blodkärl [11] [12] [13] .

Tabell 1  - "Inducerare och inhibitorer av angiogenes"

Kliniska metoder för terapeutisk angiogenes

Olika terapeutiska tillvägagångssätt används för processen för terapeutisk angiogenes:

• införande av rekombinanta proteiner - angiogenesinducerare (tillväxtfaktorer);
• användning av cellterapi;
• introduktion av genkonstruktioner som kodar för faktorer.

Introduktion av rekombinanta proteiner - inducerare av angiogenes

Genom att i detalj känna till de fysiologiska effekterna av vaskulär endoteltillväxtfaktor och ha en positiv erfarenhet av användningen av proteinfaktorer som stimulerar hematopoiesis, syntetiserade forskare proteinmolekyler av vaskulär endoteltillväxtfaktor och grundläggande fibroblasttillväxtfaktor (bFGF).
De första okontrollerade kliniska studierna på patienter med kranskärlssjukdom och patienter med kritisk nedre extremitetsischemi (CLLI) med användning av rekombinanta proteiner visade uppmuntrande preliminära resultat i termer av effekt. Data från dubbelblinda, placebokontrollerade studier har dock varit mindre optimistiska. Två stora studier som testade intrakoronar administrering av rekombinanta tillväxtfaktorer (VEGF i VIVA-studien på 178 CAD-patienter som inte var optimala kandidater för kirurgisk eller endovaskulär revaskularisering; FGF-2 i den FÖRSTA studien på 337 liknande patienter) lyckades inte hitta skillnader med resultat i placebogrupper.
I TRAFFIC-studien (FGF-2 administrerades två gånger i lårbensartären hos patienter med CLLI), där en mer uttalad ökning av tiden för smärtfri gång hos dem som fick FGF-2 under de första 3 månaderna. planade ut efter 6 månader. genom att öka smärtfri gångtid i placebogruppen. Resultaten av denna studie har emellertid väckt viss optimism angående möjligheten att använda rekombinant FGF-2 i CLLI.
Det är möjligt att misslyckandet i kontrollerade studier av terapeutisk angiogenes med användning av rekombinanta tillväxtfaktorer berodde på en felaktigt vald metod för att introducera faktorn. Rekombinanta proteiner har en kort halveringstid i blodomloppet, dessutom har det visat sig att med den intravaskulära administreringsvägen hålls en mycket liten del av proteinet kvar i myokardiet (0,1 % för intravenös administrering och 5 % för intrakoronar administrering ). För effektiv användning av rekombinanta tillväxtfaktorer är det nödvändigt att introducera dem lokalt i myokardiet eller skelettmusklerna i form av komplex med matrisproteiner som ger långvarig lokal frisättning av faktorn [14] .

Användning av cellterapi

Bildandet av nya kärl betraktas för närvarande som två inbördes relaterade processer - angiogenes och vaskulogenes. Vaskulogenes involverar deltagande av benmärgsendotelceller (EPC), som flyttar till platsen för nybildning av kärl, där de differentierar till endotelceller som redan finns på plats. Den mest välstuderade metoden för cellterapi för ischemiska sjukdomar i extremiteterna är stimulering av frisättningen av EPC-celler i blodomloppet, deras isolering från blodomloppet och införande i det ischemiska området. Baserat på analysen av prekliniska och ett antal kliniska studier kan man dra slutsatsen att införandet av endoteliocytprekursorer eller stimulering av frisättningen av endotelcellsprekursorer accelererar bildandet av kollaterala kärl, samtidigt som området för ischemisk skada minimeras. Processen kräver dock ett specialutrustat laboratorium, och antalet celler som erhålls varierar vanligtvis.
Mekanismen för angiogen verkan av stamceller (SC) som härrör från en vuxen organism inkluderar förmodligen parakrina effekter associerade med cellers sekretoriska aktivitet och deras differentiering till specifika vaskulära celler, såväl som fusion med vävnadsceller. Den specifika vikten av var och en av dessa mekanismer har inte fastställts helt, och experimentdata är ganska motsägelsefulla. Emellertid, i stor utsträckning, stimulering av neovaskularisering med introduktion av SC beror på deras sekretoriska aktivitet. Detta bekräftas av det faktum att en ökning av antalet kärl i myokardiet hos försöksdjur observerades med införandet av nästan alla typer av celler som används för cellterapi: hematopoetiska och mesenkymala celler i benmärgen, EC-prekursorer (cirkulerande och benmärg), celler erhållna från navelsträngsblod och även skelettmyoblaster [14] [15] .

Introduktion av genkonstruktioner som kodar för tillväxtfaktorer

Ett alternativ till rekombinant proteinterapi kan vara genterapi . Två typer av vektorsystem råder, som används för att leverera en terapeutisk gen till den ischemiska regionen: plasmider och rekombinanta adenovirus [16] .
Till skillnad från rekombinanta proteiner fungerar genetiska konstruktioner i målvävnaden från en till flera veckor och ger en mindre abrupt och längre ökning av angiogen faktorinnehåll, vilket undviker frekventa och upprepade injektioner, vilket i sin tur undviker sensibilisering av kroppen [14] . I prekliniska djurstudier har användningen av DNA-plasmider visat på genuttryck som varar från några dagar till flera månader med en ganska låg sannolikhet för ytterligare överföring. Denna period anses vara relativt kort jämfört med virala vektorer, vilket är en säkerhetsfaktor för preparatet baserat på plasmidvektorn. Plasmider förstörs extracellulärt såväl som intracellulärt av nukleaser , vilket ger lokalisering och tidsbegränsning av processen. Under ett stort antal genterapistudier för stimulering av angiogenes användes främst lokala injektioner för att uppnå maximal säkerhet och effekt [17] .
Användningen av adenovirala vektorer kännetecknas av en hög effektivitet i genmaterialöverföring. Men det måste tas med i beräkningen att adenovirala antikroppar ofta finns i människokroppen, vilket minskar effektiviteten av överföringen till en nivå av 5% - en nivå som är jämförbar med den som är karakteristisk för icke-viral genöverföring. Dessutom kräver viral genöverföring speciella biosäkerhetsåtgärder, som inte är nödvändiga för icke-virala genöverföringsvektorer. Säkerhetsfrågor återspeglas också i den ökade förekomsten av biverkningar i kliniska prövningar med adenovirala vektorer: övergående feber, förhöjt C-reaktivt protein, förhöjda leverenzymer och adenovirala antikroppstitrar [18] .

Realisering av informationen som finns i plasmiden eller det rekombinanta viruset sker som ett resultat av proteinsyntes. Syntesen fortsätter på traditionellt sätt ( transkription , översättning ). Bildandet av angiogen tillväxtfaktor orsakar ett antal fysiologiska förändringar som leder till tillväxten av ett nytt kärl. Ett stort antal angiogena faktorer är involverade i processen för angiogenes, men det mest aktiva proangiogena cytokinet är vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF), som också är den mest studerade både i prekliniska och kliniska studier.

Processen för kärltillväxt med dess deltagande kan beskrivas i följande sekvens [11] :

1. Bindning av VEGF till receptorer på ytan av endotelceller i befintliga kärl.
2. Aktivering av endoteliocyter på grund av förändringar i konfigurationen av VEGF-receptorer.
3. Frisättning av aktiverade endotelceller av proteolytiska enzymer som löser upp basalmembranet som omger moderns kärl.
4. Upplösning av matrissubstansen genom matrismetalloproteaser.
5. Proliferation och migration av endotelceller genom basalmembranet in i den ischemiska zonen med hjälp av adhesionsmolekyler på cellytan.
6. Bindning av endoteliocyter till varandra och bildning av tubulära strukturer.
7. Bildning av vaskulära slingor.
8. Differentiering av vaskulära slingor till arteriella och venösa kärl.
9. Mognad av nya blodkärl genom att fästa parietal andra typer av celler (glad muskel, pericyter), och stabilisering av vaskulär arkitektur.
10. Början av blodflöde i ett moget stabilt kärl.

Angiogen modifiering av material (vitalisering)

Frånvaron av en kärlbädd i de placerade implantaten, liksom dess otillräckligt snabba utveckling och integrering med kärlnätverket i mottagarområdet, är ett av de viktigaste problemen förknippade med implantatets "misslyckande" att "fungera". Lösningen på problemet med vaskularisering av konstgjorda implantat utvecklas på två sätt: 1 - skapa förutsättningar för aktiv vaskularisering efter implantation med hjälp av olika biotekniska strukturer (med hjälp av tillväxtfaktorer, stamceller); 2 - skapandet av det vaskulära nätverket före implantation i kroppen in vitro [19] .

Genterapipreparat baserade på plasmider som kodar för vaskulära endoteltillväxtfaktorer används för angiogen modifiering ( vitalisering ) av syntetiska fibrösa material [7] . Sådana modifierade genaktiverade material används för att skapa vaskulariserade matriser av biokonstruerade organ och vävnader [7] [20] .

Genpreparat för terapeutisk angiogenes

När man begärde publikationer i databasen relaterade till terapeutisk angiogenes och tillväxtfaktorer erhölls följande statistik:

Den kliniska studien domineras av genterapikonstruktioner som bär på VEGF-genen. Tabell nr 2 återspeglar de stora studier som genomförts och pågår med dessa prototypläkemedel.

Tabell 2. Kliniska studier av genterapikonstruktioner med VEGF-genen

Förkortningar: IHD — ischemisk hjärtsjukdom; HINK - kronisk ischemi i de nedre extremiteterna; KINK - kritisk ischemi i de nedre extremiteterna

Det första och enda genterapiläkemedlet för terapeutisk angiogenes registrerades i Ryssland 2011 (datum för Republiken Uzbekistan -28.09.2011). Läkemedlet är en plasmid supercoiled deoxiribonukleinsyra pCMV-VEGF165 som kodar för human vaskulär endoteltillväxtfaktor. Indikationer för användning av läkemedlet: i komplex terapi för revaskularisering vid ischemi i de nedre extremiteterna av aterosklerotiskt ursprung (IIa-III grad enligt A.V. Pokrovsky-Fontein).
Läkemedlet kom in på marknaden under handelsnamnet " Neovasculgen ". Det administreras lokalt, intramuskulärt, så nära det ischemiska området som möjligt och stimulerar utvecklingen av kollateral cirkulation. [2, 38, 39]
Enligt resultaten från kliniska studier av det ryska läkemedlet kan följande kliniska egenskaper hos terapeutisk angiogenes noteras:

1. Användningen av läkemedlet i komplex konservativ behandling leder till en stabil klinisk förbättring (bibehåller effekten i 3 månader, 6 månader, 1 år, 2 år), vilket uttrycks i en ökning av smärtfri gångavstånd, en ökning av ankel-brachial index och transkutan syrespänning [17] .
2. Indikatorn "antal större amputationer, dödsfall" hos patienter med stadium III ischemi enligt klassificeringen av A.V. Pokrovsky-Fontein är 6% [2].
3. Uttalad klinisk effekt i olika svårighetsgrader av ischemi i de nedre extremiteterna enligt klassificeringen av A. V. Pokrovsky-Fontein (IIa, IIb, III) [38].

Tabell 3. Resultat av användning av ett läkemedel baserat på en nukleinsyra (Neovasculgen) som kodar för VEGF i komplex konservativ terapi [17] .

* statistiskt signifikanta skillnader jämfört med baseline (p≤0,05, icke-parametriskt Wilcoxon-test).
Vid utvärdering av dynamiken hos indikatorer, med hänsyn till den initiala graden av ischemi, fann man att för alla grupper av patienter (IIA, IIB, stadium III av ischemi) en karakteristisk ihållande positiv dynamik. Således ökade avståndet för smärtfri gång i större utsträckning vid måttlig och svår ischemi, vilket framgår av ökningen med 90 dagar. med 160 % och 173 % med IIB och III Art. ischemi, respektive. Det verkar mycket signifikant att ABI i den svåraste patientgruppen ökade med mer än 0,1 från nivån 0,33±0,08 till 0,46±0,07 efter 90 dagar. och upp till 0,48±0,1 på ett år. Samma trend observerades när det gäller TcPO2 - hos mer allvarliga patienter noterades ett mer uttalat svar på behandlingen (en ökning med 35,2 % efter 90 dagar och 32,5 % efter ett år).

Tabell 4. Resultat av användning av ett läkemedel baserat på en nukleinsyra (Neovasculgen) som kodar för VEGF i komplex konservativ terapi [21] .

* statistiskt signifikanta skillnader från baslinjen
' statistiskt signifikanta skillnader mellan 90 dagar. och 1 år (p≤0,05, icke-parametriskt Wilcoxon-test).

Anteckningar

1. ↑ Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. et al. Terapeutisk angiogenes. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. ↑ Schwalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. et al. Effekt och säkerhet av Neovasculgen i den komplexa terapin av patienter med kronisk ischemi i de nedre extremiteterna (IIb-III fas av kliniska prövningar) . Celltransplantation och vävnadsteknik . 2011; 3:76-83.
3. ↑ Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Verkligheter och framtidsutsikter för användningen av genterapi vid kardiovaskulär kirurgi Celltransplantation och vävnadsteknik . 2012; 2:51-5.
4. ↑ Isner J., Walsh K., Symes J. et al. Arteriell genterapi för terapeutisk angiogenes hos patienter med perifer artärsjukdom. omlopp. 1995; 91:2687-92.
5. ↑ Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. et al. Kliniska bevis för angiogenes efter arteriell genöverföring av phVEGF165 hos patient med ischemisk lem. Lancet 1996 Aug 10;348(9024):370-4.
6. ↑ Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Nedre extremitetsödem associerat med genöverföring av naket DNA som kodar för vaskulär endoteltillväxtfaktor. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. ↑ 1 2 3 Klabukov I.D., Balyasin M.V., Lundup A.V., Krasheninnikov M.E., Titov A.S., Mudryak D.L., Shepelev A.D., Tenchurin T.Kh. ., Chvalun S.N., Dyuzheva T.G. Angiogen vitalisering av biokompatibel och biologiskt nedbrytbar matris (experimentell studie in vivo)  // Patologisk fysiologi och experimentell terapi. - 2018. - T. 62 , nr 2 . - S. 53-60 . — ISSN 0031-2991 . Arkiverad från originalet den 26 juni 2018. (ryska)
8. ↑ 1 2 Madeddu P. Terapeutisk angiogenes och vaskulogenes för vävnadsregenerering. experimentell fysiologi. 2004; 90:315-26.
9. ↑ Mäkinen K. Angiogenesis — ett nytt mål inom perifer artär ocklusiv sjukdomsterapi. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
10. ↑ Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Angiogen och antiangiogen genterapi. Genterapi. 2005; 12:159-69.
11. ↑ 1 2 Li W., Li V. Angiogenesis vid sårläkning. Modern kirurgi. Ett komplement till nutida kirurgi. 2003; 36.
12. ↑ Azrin M. Angiogenes, protein och genleverans. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
13. ↑ Sylven C. Angiogen genterapi. Dagens droger. 2002; 38:819-27.
14. ↑ 1 2 3 Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Terapeutisk angiogenes: prestationer, problem, framtidsutsikter. Kardiologibulletin. 2007; 2:5-15.
15. ↑ Isner J., Vale P., Losordo D. och el. Angiogenes och hjärt-kärlsjukdom. Dialoger in cardiovascular medicine, 2001:3:145-70.
16. ↑ Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Möjliga molekylära mekanismer för funktion av plasmidkonstruktioner innehållande VEGF-genen . Celltransplantation och vävnadsteknik. 2011; 6 (3):24-8.
17. ↑ 1 2 3 Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. et al. Teoretiska och praktiska aspekter av användningen av ett läkemedel baserat på en nukleinsyra som kodar för endotelial vaskulär tillväxtfaktor ("Neovasculgen"). Angiologia.ru. 2011; ett.
18. ↑ Meyer F., Finer M. Genterapi: framsteg och utmaningar. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
19. ↑ Reshetov I.V., Zalyanin A.S., Filippov V.V., Kharkova N.V., Sukortseva N.S., Popov V.K., Mirtov A.V., Komlev V.S. Sätt för vitalisering av biokonstruerade strukturer för restaurering av muskuloskeletala systemet (inom ramen för RFBR-anslaget på ämnet "Studie av sätten för vaskularisering och innervering av 3D-individuella implantat för restaurering av muskuloskeletala systemet")  // Huvud och hals 1/2. - 2016. - Maj. - S. 55-59 . — ISSN 2310-5194 . Arkiverad från originalet den 27 juni 2018.
20. ↑ Deev, R. V., Drobyshev, A. Yu., Bozo, I. Ya., Galetsky, D. V., Korolev, V. O., Eremin, I. I., ... & Isaev, A A. (2013). Skapande och utvärdering av den biologiska verkan av ett genaktiverat osteoplastiskt material som bär den mänskliga VEGF-genen Arkiverad 26 juni 2018 på Wayback Machine . Genes and Cells , 8 (3), 78-85.
21. ↑ Deev R.V., Kalinin R.E., Chervyakov Yu.V. Bulletin från National Medical and Surgical Center. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.

Litteratur

1. Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. et al. Terapeutisk angiogenes. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. Shvalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. et al. Effekt och säkerhet av Neovasculgen i komplex terapi av patienter med kronisk ischemi i de nedre extremiteterna (IIb-III fas av kliniska prövningar). KTTI. 2011; 3:76-83.
3. Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Verkligheten och utsikterna för att använda genterapi vid kardiovaskulär kirurgi. CTTI 2012; 2:51-5.
4. Isner J., Walsh K., Symes J. et al. Arteriell genterapi för terapeutisk angiogenes hos patienter med perifer artärsjukdom. omlopp. 1995; 91:2687-92.
5. Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. et al. Kliniska bevis för angiogenes efter arteriell genöverföring av phVEGF165 hos patient med ischemisk lem. Lancet 1996 Aug 10;348(9024):370-4.
6. Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Nedre extremitetsödem associerat med genöverföring av naket DNA som kodar för vaskulär endoteltillväxtfaktor. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. Madeddu P. Terapeutisk angiogenes och vaskulogenes för vävnadsregenerering. experimentell fysiologi. 2004; 90:315-26.
8. Mäkinen K. Angiogenesis — ett nytt mål inom perifer artär ocklusiv sjukdomsterapi. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
9. Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Angiogen och antiangiogen genterapi. Genterapi. 2005; 12:159-69.
10. Li W., Li V. Angiogenes vid sårläkning. Modern kirurgi. Ett komplement till nutida kirurgi. 2003; 36.
11. Azrin M. Angiogenes, protein och genleverans. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
12. Sylven C. Angiogen genterapi. Dagens droger. 2002; 38:819-27.
13. Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Terapeutisk angiogenes: prestationer, problem, framtidsutsikter. Kardiologibulletin. 2007; 2:5-15.
14. Isner J., Vale P., Losordo D. och el. Angiogenes och hjärt-kärlsjukdom. Dialoger in cardiovascular medicine, 2001:3:145-70.
15. Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Möjliga molekylära mekanismer för funktion av plasmidkonstruktioner innehållande VEGF-genen . CTTI 2011; 6 (3):24-8.
16. Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. et al. Teoretiska och praktiska aspekter av användningen av ett läkemedel baserat på en nukleinsyra som kodar för endotelial vaskulär tillväxtfaktor ("Neovasculgen"). Angiologia.ru. 2011; ett.
17. Meyer F., Finer M. Genterapi: framsteg och utmaningar. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
18. Baumgartner I., Pieczek A., Manor O. et al. Konstitutivt uttryck av phVEGF165 efter intramuskulär genöverföring främjar utveckling av kollaterala kärl hos patienter med kritisk extremitetsischemi. Upplaga 1998; 97:1114-23.
19. Symes J., Losordo D., Vale P. et al. Genterapi med vaskulär endotelial tillväxtfaktor för inoperabel kranskärlssjukdom. Ann Thorac Surg 1999; 68:830-36.
20. Fortuin F., Vale P., Losordo D. et al. Ett års uppföljning av direkt myokardgenöverföring av vaskulär endotelial tillväxtfaktor-2 med användning av naken plasmid deoxiribonukleinsyra genom torakotomi hos patienter utan alternativ. Am J Cardiol. 2003; 92:436-9.
21. Reilly J., Grise M., Fortuin F. et al. Långsiktiga (2-åriga) kliniska händelser efter transthorax intramyokardial genöverföring av VEGF-2 hos patienter med nooption. J Interv Cardiol. 2005; 18:27-31.
22. Vale P., Losordo D., Milliken C. et al. Vänsterkammar elektromekanisk kartläggning för att bedöma effektiviteten av phVEGF (165) genöverföring för terapeutisk angiogenes vid kronisk myokardischemi. Upplaga 2000; 102:965-74.
23. Sarkar N., Ruck A., Kallner G. et al. Effekter av intramyokardinjektion av phVEGF-A165 som enda terapi hos patienter med refraktär kranskärlssjukdom—12 månaders uppföljning: angiogen genterapi. J Intern Med. 2001; 250:373-81.
24. Losordo D., Vale P., Hendel R. et al. Fas 1/2 placebokontrollerad, dubbelblind, dos-eskalerande studie av myokard vaskulär endotelial tillväxtfaktor 2 genöverföring genom katetertillförsel hos patienter med kronisk myokardischemi. Upplaga 2002; 105:2012-18.
25. Gyongyosi M., Khorsand A., Zamini S. et al. NOGA guidad analys av regionala myokardperfusionsavvikelser behandlade med intramyokardiella injektioner av plasmid som kodar för vaskulär endotelial tillväxtfaktor A-165 hos patienter med kronisk myokardischemi: subanalys av EUROINJECT-ONE multicenter dubbelblinda randomiserade studie. Upplaga 2005; 112 (Suppl): I157-I165.
26. Kastrup J., Jorgensen E., Ruck A. et al. Direkt intramyokardiell plasmid vaskulär endotelial tillväxtfaktor-A165 genterapi hos patienter med stabil svår angina pectoris. En randomiserad dubbelblind placebokontrollerad studie: Euroinject One Trial. J Am Call Cardiol. 2005; 45:982-8.
27. Stewart D., Kutryk M., Fitchett D. et al. VEGF-genterapi misslyckas med att förbättra perfusion av ischemiskt myokardium hos patienter med avancerad kranskärlssjukdom: resultat av NORTHERN-studien. Mol. Ther. 2009; 17:1109-15.
28. Mendiz O., Favaloro L., Diez M. et al. Sammanfattning 15235: högdosplasmid VEGF-genöverföring hos patienter med allvarlig kranskärlssjukdom: slutresultat av den första latinamerikanska studien av genterapi vid myokardischemi. Upplaga 2011; 124 (Suppl.): A15235.
29. Kusumanto Y., van Weel V., Mulder N. et al. Behandling med intramuskulär vaskulär endotelial tillväxtfaktorgen jämfört med placebo för patienter med diabetes mellitus och kritisk extremitetsischemi: en dubbelblind randomiserad studie. Hum Gene Ther 2006; 17:683-91.
30. Kukula K., Chojnowska L., Dabrowski M. et al. Intramyokardiell plasmidkodande human vaskulär endoteltillväxtfaktor A165/ grundläggande fibroblasttillväxtfaktorterapi med perkutan transkatetermetod hos patienter med refraktär kranskärlssjukdom (VIF-CAD). Am Heart J 2011; 161:581-9.
31. Makinen K., Manninen H., Hedman M. et al. Ökad vaskularitet detekterad genom digital subtraktionsangiografi efter VEGF-genöverföring till mänsklig artär i nedre extremiteter: en randomiserad, placebokontrollerad, dubbelblind fas II-studie. Mol Ther 2002; 6:127-33.
32. Hedman M., Hartikainen J., Syvanne M. et al. Säkerhet och genomförbarhet av kateterbaserad lokal intrakoronär vaskulär endoteltillväxtfaktorgenöverföring i förebyggande av postangioplastik och in-stent-restenos och vid behandling av kronisk myokardischemi: fas II-resultat av Kuopio Angiogenesis Trial (KAT). Upplaga 2003; 107:2677-83.
33. Rajagopalan S., Mohler III E., Lederman R. et al. Regional angiogenes med vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF) vid perifer artärsjukdom: design av RAVE-studien. Am Heart J 2003; 145:1114-18.
34. Rosengart T., Lee L., Patel S. et al. Angiogenes genterapi: fas I bedömning av direkt intramyokardiell administrering av en adenovirusvektor som uttrycker VEGF121 cDNA till individer med kliniskt signifikant allvarlig kranskärlssjukdom. Upplaga 1999; 100:468-74.
35. Stewart D., Hilton J., Arnold J. et al. Angiogen genterapi hos patienter med icke-revaskulariserbar ischemisk hjärtsjukdom: en randomiserad, kontrollerad fas 2-studie av AdVEGF (121) (AdVEGF121) kontra maximal medicinsk behandling. Genterapi 2006; 13:1503-11.
36. Kastrup J., Jorgensen E., Fuchs S. et al. En randomiserad, dubbelblind, placebokontrollerad, multicenterstudie av säkerheten och effekten av BIOBYPASS (AdGVVEGF121.10NH) genterapi hos patienter med refraktär avancerad kranskärlssjukdom: NOVA-studien. Euro Intervention 2011; 6:813-18.
37. Ropper A., ​​Gorson K., Gooch C. et al. Vaskulär endoteltillväxtfaktorgenöverföring för diabetisk polyneuropati: en randomiserad, dubbelblind studie. Ann Neurol 2009; 65:386-93.
38. Deev R. V., Kalinin R. E., Chervyakov Yu. V. et al. Resultaten av användningen av genterapiläkemedlet "Neovasculgen" hos patienter med kronisk ischemi i nedre extremiteterna: 1 års uppföljning. Bulletin från National Medical and Surgical Center. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.
39. Schwalb P. G., Kalinin R. E., Gryaznov S. V. et al. Säkerhet och kortsiktig effekt av ett genterapiläkemedel hos patienter med kronisk ischemi i nedre extremiteterna. Kardiologi och kardiovaskulär kirurgi. 2011; 4:61-6.