Flödescytometri (flödescytometri) är en metod för att studera dispersa medier i form av styckevis analys av elementen i den dispergerade fasen med hjälp av ljusspridning och fluorescenssignaler . Namnet på metoden är förknippat med huvudapplikationen, nämligen med studiet av enstaka biologiska celler i en ström.
Grunden för metoden är 1) användningen av ett hydrofokuseringssystem, som säkerställer passage av celler i en ström en efter en; 2) cellbestrålning med laserstrålning; 3) registrering av ljusspridning och fluorescenssignaler från varje cell.
Dessutom tar analysen hänsyn till nivån av fluorescens av kemiska föreningar som utgör cellen (autofluorescens) eller införs i provet före flödescytometri.
Cellsuspensionen, tidigare märkt med fluorescerande monoklonala antikroppar eller fluorescerande färgämnen, kommer in i vätskeströmmen som passerar genom flödescellen. Villkoren är valda på ett sådant sätt att cellerna radas upp efter varandra på grund av den sk. hydrodynamisk fokusering av en stråle i en stråle. Hydrodynamisk fokusering tillhandahålls av en stor specifik flödeshastighet i den yttre strålen (jet-mantel) jämfört med den specifika provflödeshastigheten. Schematiskt visas operationsprincipen i videon. När den specifika flödeshastigheten i den yttre strålen ökar, raderas cellerna efter varandra. I det ögonblick cellen korsar laserstrålen registrerar detektorerna:
Spridningsintensiteten beror på cellens morfologi (storlek, form, inre struktur), på cellens orientering i flödet i förhållande till den infallande strålningens riktning och på den infallande strålningens polarisationstillstånd.
Fluorescensintensiteten bildas av två bidrag: specifik fluorescens och autofluorescens. Specifik fluorescens är associerad med emissionen av fluorokrommolekyler som är specifikt associerade med vissa cellulära komponenter (receptorer, intracellulära proteiner, DNA, etc.). Autofluorescens är associerad med emission av cellens egna molekyler (proteiner, nukleinsyror, etc.). Intensiteten av specifik fluorescens beror på antalet fluorokrommolekyler i cellen, våglängden för den exciterande strålningen, absorptionstvärsnittet (extinktion) av fluorokromen vid denna våglängd, kvantutbytet av fluorokromen, den numeriska aperturen för den optiska fluorescensuppsamlingssystem och spektralområdet för det optiska filtrerings- och detektionssystemet. Intensiteten av autofluorescens beror på liknande sätt på de optiska egenskaperna hos cellens egna molekyler. I praktiken utförs cellförberedelse före mätning på ett sådant sätt att bidraget från specifik fluorescens överstiger bidraget från autofluorescens med flera storleksordningar.
Anordningar för att analysera celler med flödescytometri kallas flödescytometrar eller flödescytometrar . De mest populära flödescytometrarna i Ryssland och OSS är Beckman Coulter Life Sciences [1] och Becton Dickinson Biosciences .
Tandemfärgämnen:
"Quantum dots" QD560, QD590, etc.
| Patologi i medicin | |
|---|---|
| patohistologi | Cellskador apoptos Nekrobios karyopynosis karyorrhexis karyolys Nekros koagulativ nekros kollikationsnekros kallbrand kvarstad hjärtattack Cellulär anpassning Atrofi Hypertrofi Hyperplasi Dysplasi Metaplasi skivepitelaktig körtel- Dystrofi Protein fet kolhydrat Mineral |
| Typiska patologiska processer |
|
| Laboratoriediagnostik och obduktion _ |
|