Fragment av Klenov

Den aktuella versionen av sidan har ännu inte granskats av erfarna bidragsgivare och kan skilja sig väsentligt från versionen som granskades den 26 december 2015; kontroller kräver 2 redigeringar .

Klenow- fragmentet är ett  stort proteinfragment som härrör från den enzymatiska klyvningen av DNA-polymeras I från Escherichia coli av proteaset subtilisin. Klenow-fragmentet beskrevs första gången 1970 och hade 5' → 3'-polymerasaktivitet i kombination med 3' → 5'- exonukleasaktivitet (korrektor), men hade inte 5' → 3'-exonukleasaktivitet [1] .

Andra mindre fragment som härrör från enzymatisk digestion kunde ha 5' → 3'-exonukleasaktivitet, men saknade de två aktiviteterna som är karakteristiska för Klenow-fragmentet.

Klenow-fragmentet användes som ett DNA-polymeras i de första metoderna för polymeraskedjereaktion [2] och ersattes först efter en tid med ett termostabilt Taq-polymeras [3] .

Används för närvarande för DNA-märkning ("fyll i" 3'-kortändar med "slumpmässiga hexamerer"), för DNA-sekvensering med Sanger-metoden och för DNA- syntes av andra strängen.

Anteckningar

  1. ↑ Klenow H och Henningsen I. Selektiv eliminering av exonukleasaktiviteten hos deoxiribonukleinsyrapolymeraset från Escherichia coli B av Limited Proteolysis   // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 1970. - Vol. 65 . - S. 168-175 . - doi : 10.1073/pnas.65.1.168 . — PMID 4905667 .
  2. ↑ Saiki R.K. et al. Enzymatisk amplifiering av β-globin genomiska sekvenser och restriktionsplatsanalys för diagnos av sicklecellanemi  (engelska)  // Science : journal. - 1985. - Vol. 230 . - P. 1350-1354 . - doi : 10.1126/science.2999980 . — PMID 2999980 .
  3. ↑ Saiki et al. Primerriktad enzymatisk amplifiering av DNA med ett termostabilt DNA-polymeras  (engelska)  // Science : journal. - 1988. - Vol. 239 . - s. 487-491 . - doi : 10.1126/science.2448875 . — PMID 2448875 .