Adeno-associerat virus

adeno-associerat virus

Adeno-associerade virus
vetenskaplig klassificering
Grupp:Virus [1]Rike:MonodnaviriaRike:ShotokuviraeSorts:cossaviricotaKlass:QuintoviricetesOrdning:PiccoviralesFamilj:ParvovirusUnderfamilj:ParvovirinaeSläkte:DependoparvovirusSe:adeno-associerat virus
Internationellt vetenskapligt namn
Adeno-associerat dependoparvovirus A
Synonymer
  • Adeno-associerat virus 1 [2]
  • Adeno-associerat virus-1 [2] [3]
  • Adeno-associerat virus-2 [3]
  • Adeno-associerat virus-3 [3]
  • Adeno-associerat virus-4 [3]
Baltimore-gruppen
II: ssDNA-virus

Adeno-associerat virus ( eng.  Adeno-associerat dependoparvovirus A , AAV) är ett litet virus som infekterar celler hos människor och vissa andra primater . Det adenoassocierade viruset verkar inte orsaka sjukdom hos människor och framkallar därför ett svagt immunsvar.

Adeno-associerat virus kan infektera delande och icke-delande celler och kan integrera sitt genom i värdgenomet. Dessa egenskaper gör AAV till en särskilt attraktiv kandidat för design av virala vektorer för genterapi [4] .

Adeno-associerat virus tillhör släktet Dependoparvovirus av parvovirusfamiljen ( Parvoviridae ) . Viruset är litet (20 nm), har inget lipidhölje och kodar inte för sina egna replikationsenzymer .

Historik

1965 publicerade Robert Atchison en artikel som beskrev ett nytt virus som kallas adenoassocierat virus [5] . Viruspartiklar har upptäckts med elektronmikroskopi i apadenoviruspreparat som har transplanterats flera gånger på primära njurcellskulturer från rhesusapa . Atchison-gruppen separerade 24 nm-partiklar av det nya viruset från större 80 nm adenoviruspartiklar med hjälp av ultrafiltrering [6] .

Efter isolering visades det att partiellt renade adeno-associerade virusvirioner inte kan replikera på egen hand , men kan replikera och spridas i adenovirus-infekterade kulturer . Det adenoassocierade viruset visade sig således vara ett defekt följeslagningsvirus som behöver ett hjälpvirus för fullständig replikation. Eftersom det adenoassocierade viruset inte kodar för sitt eget DNA-polymeras , kräver det ett hjälpvirus, vanligtvis ett adenovirus, för att replikera [7] .

I juli 2013, som ett resultat av en revidering av familjen, slogs fyra närbesläktade arter samman till en, vilket ändrade namnet på släktet till Dependoparvovirus , och namnet på arten till Adeno-associerat dependoparvovirus A [3] .

Vektor för genterapi

Fördelar och nackdelar

Vildtyp adenoassocierat virus har vissa fördelar för genterapi . En av de största fördelarna är att detta virus inte är patogent . Adeno-associerat virus kan infektera icke-delande celler och kan integreras i värdgenomet på specifika platser (AAVS1) på den nittonde kromosomen [8] .

Denna funktion gör adeno-associerade virus mer förutsägbara än retrovirus . Retrovirus är potentiellt farliga som mutagener , eftersom de slumpmässigt sätts in i värdgenomet, vilket kan leda till uppkomsten av cancertumörer. Det adenoassocierade virusgenomet sätts vanligtvis in på ett specifikt ställe, och slumpmässiga insättningar sker med försumbar frekvens. När man skapar vektorer för genterapi baserade på adenoassocierat virus tas rep- och cap -generna bort från det virala DNA:t . Den önskade genen, tillsammans med promotorn , infogas mellan inverterade terminala upprepningar ( inverterade terminala upprepningar, ITR) , som ett resultat av vilka konkatamerer bildas i kärnan efter syntesen av den andra DNA- strängen av det cellulära DNA-polymeraset .  Vektorer för genterapi baserade på adenoassocierade virus bildar episomala konkatamerer i värdcellens kärna. I icke-delande celler förblir dessa konkatamerer intakta; i delande celler går adenoassocierat virus-DNA förlorat under celldelningar, eftersom episomalt DNA inte replikeras under värdcell- DNA-replikation . Oavsiktlig insättning av adenoassocierat virus-DNA i värdgenomet är mycket sällsynt. Adeno-associerat virus har också mycket låg immunogenicitet , uppenbarligen begränsad av den låga effektiviteten av att producera neutraliserande antikroppar , medan det senare inte tydligt har visats vara cytotoxiskt [9] [10] [11] . De beskrivna egenskaperna, såväl som förmågan att infektera icke-delande celler, bestämmer fördelarna med adenoassocierat virus framför adenovirus för genterapi.

Användningen av adenoassocierat virus har också vissa nackdelar. Kapaciteten hos virusgenomet som är tillgängligt för kloning av terapeutiska gener är endast cirka 4800 baspar . Således är denna vektor inte lämplig för kloning av stora gener. De inverterade terminala upprepningarna av de två genomen kan hybridisera och bilda huvud-svanskonkatamerer, vilket nästan fördubblar vektorns kapacitet.

Infektion med vildtypsvirus orsakar ofta aktivering av humoral immunitet . Aktiviteten hos neutraliserande antikroppar minskar i vissa fall användbarheten av AAV2- serotypen . AAV2 kan också komma in i hjärnan och är mycket neuronspecifik .

Kliniska prövningar

För närvarande genomgår adenoassocierade virusbaserade läkemedel (vektorer) för behandling av cystisk fibros och hemofili det första steget av kliniska prövningar. Lovande resultat har erhållits från den första fasen av kliniska prövningar för läkemedel mot Parkinsons sjukdom . Andra kliniska prövningar har visat säkerheten hos adenoassocierade virusvektorer vid Canavans sjukdom , muskeldystrofi och Bilshovsky-

Kliniska prövningar av vektorer baserade på den adenoassocierade virala vektorn [12]
Sjukdom Gen Administreringssätt Testfas Antal försökspersoner Status
cystisk fibros CFTR Lungor, aerosol jag 12 Avslutad
CFTR Lungor, aerosol II 38 Avslutad
CFTR Lungor, aerosol II 100 Avslutad
Hemofili B FIXERA Intramuskulär jag 9 Avslutad
FIXERA leverartären jag 6 Färdiga
Artrit TNFR:Fc intraartikulärt jag ett Fortsätta
ärftligt emfysem AAT Intramuskulär jag 12 Fortsätta
muskeldystrofi Sarkoglykan Intramuskulär jag tio Fortsätta
Parkinsons sjukdom GAD65, GAD67 inuti skallen jag 12 Slutförd [13]
Canavan sjukdom AAC inuti skallen jag 21 Fortsätta
Battens sjukdom CLN2 inuti skallen jag tio Fortsätta
Alzheimers syndrom NGF inuti skallen jag 6 Fortsätta
spinal muskelatrofi SMN1 intratekal I–III femton Flera försök slutförda, flera pågående ( Zolgensma )

Kliniska prövningar för behandling av prostatacancer är i stadium III från och med 2005 [12] , men dessa ex vivo-studier inkluderar inte direkt administrering av ADV till patienter.

Patologi

Adeno-associerat virus anses inte orsaka sjukdom hos människor. Detta virus har dock visat sig vara en riskfaktor för manlig infertilitet [14] . Det genomiska DNA från adenoassocierade virus finns i spermaprover med nedsatt struktur och funktion hos spermier . Däremot har inget direkt samband hittats mellan denna infektion och manlig infertilitet.

Roll i utvecklingen av hepatocellulärt karcinom

Nyligen genomförda studier av patienter med sällsynta former av hepatocellulärt karcinom tyder på att AAV2-viruset kan spela en roll i utlösare av denna cancer. Eftersom AAV2-viruset riktar sig mot gener som spelar en viktig roll i cellreproduktion, tror forskarna att infektion leder till överaktivering av dem, vilket resulterar i tumörtillväxt. Denna upptäckt ifrågasätter säkerheten med att använda AAV2-virus för genterapi [15] .

Struktur

Genom, transkriptom och proteom

Genomet av det adenoassocierade viruset innehåller (+ eller -) enkelsträngat DNA (ssDNA) med en längd på cirka 4,7 tusen nukleotider. I ändarna av den genomiska DNA-molekylen finns det inverterade terminala upprepningar ( ITR ) .  Genomet innehåller två öppna läsramar ( ORFs ) : rep och cap . Den första innehåller fyra överlappande gener som kodar för Rep-proteiner, vilka är nödvändiga för virusets livscykel , den andra läsramen innehåller överlappande nukleotidsekvenser av kapsidproteiner : VP1, VP2 och VP3, som bildar kapsidens ikosaedriska huvud [16] .  

Inverterade terminalupprepningar

Sekvensen av inverterade terminala upprepningar ( eng.  Inverted Terminal Repeat, ITR ) är 145 nukleotider. ITR är symmetriskt belägna i genomet av adenoassocierade virus och krävs för genomisk DNA- replikation [17] . En annan av egenskaperna hos ITR är förmågan att bilda hårnålar, vilket möjliggör syntes av den andra DNA-strängen utan deltagande av primas . Inverterade terminala upprepningar krävs också för integrering av viralt DNA i en specifik region av den nittonde mänskliga kromosomen och för frisättning av provirus -DNA från kromosomen [18] [19] såväl som för bildandet av komplex av adenoassocierade virus-DNA med deoxiribonukleasresistenta höljeproteiner [20] .

Vid genterapi måste ITR vara i cis-position efter den terapeutiska genen. Detta mönster används för att erhålla rekombinanta vektorer baserade på adenoassocierat virus ( eng.  rekombinant AAV, rAAV ) innehållande reportergener eller terapeutiska gener. Det har visats att ITR:er inte krävs i cis-position för replikering och kapsidveckning. Ett cis -verkande Rep-beroende element (CARE ) hittades i nukleotidsekvensen av rep-genen . I cis-position förbättrar CARE replikationen och sammansättningen av viruspartiklar [21] [22] [23] [24] .  

Gener och proteiner rep

Den "vänstra sidan av genomet " innehåller två promotorer  , p5 och p19, från vilka två överlappande mRNA av olika längd transkriberas . Varje gen som kodar för motsvarande mRNA innehåller ett intron som kan skäras ut under splitsningsprocessen . Som ett resultat kan fyra olika mRNA syntetiseras, och följaktligen fyra olika Rep-proteiner med överlappande sekvenser. Proteiner namnges enligt deras molekylära massor i kDa : Rep78, Rep68, Rep52 och Rep40 [25] . Rep78 och 68 binder specifikt som en primer till en hårnål som bildas av inverterade terminala upprepningar och skär den sedan vid terminalupplösningsstället . Rep78 och 68 har visat sig behövas för den specifika integrationen av adenoassocierat virus-DNA i värdgenomet. Fyra Rep-proteiner binder ATP och har helikasaktivitet . Dessa proteiner förbättrar transkriptionen från p40-promotorn, men försvagar transkriptionen från p5- och p19-promotorerna [19] [25] [26] [27] [28] [29] .  

cap- gener och VP-proteiner

Den "högra sidan" av (+)- strängen av det adenoassocierade virusgenomiska DNA :t innehåller överlappande sekvenser som kodar för tre kapsidproteiner  , VP1, VP2 och VP3. Transkription av dessa gener startar från en enda promotor , p40. Molekylvikten för motsvarande proteiner är 87, 72 respektive 62 kDa [ 30] . Alla tre proteinerna översätts från samma mRNA. Efter transkription kan pre-mRNA splitsas på två olika sätt, varvid en längre eller kortare intron skärs ut och mRNA på 2300 eller 2600 nukleotider bildas . Vanligtvis, speciellt i närvaro av adenovirus , skärs ett längre intron ut. I denna form skärs det första startkodonet AUG ut , från vilket syntesen av VP1-proteinet börjar, och nivån av VP1-proteinsyntesen minskar. Det första kodonet AUGsom finns kvar i fallet med ett längre transkript är startkodonet för VP3-proteinet. Nukleotidsekvensen som föregår detta kodon inom samma läsram innehåller emellertid sekvensen som ACGkodar för treonin , som är omgiven av den optimala Kozak-sekvensen . Detta leder till en minskning av syntesen av VP2-proteinet (som är ett VP3-protein med ytterligare aminosyrarester vid N-terminalen [31] [32] [33] [34] .

Eftersom det större intronet företrädesvis skärs ut från pre-mRNA:t och eftersom kodonet ACGär ett svagare startkodon, uttrycks motsvarande proteiner in vivo i ett förhållande av ungefär 1:1:20, och proteinerna ingår också i den virala partikeln i samma förhållande [35] . Ett unikt fragment vid N-terminalen av VP1-proteinet har fosfolipas A2 ( PLA2 ) aktivitet ,  vilket förmodligen krävs för frisättning av viruspartiklar från sena endosomer [36] . Muralidar et al visade att VP2- och VP3-proteinerna är viktiga för sammansättningen av en viral partikel [33] . Warrington et al visade att VP2-proteinet inte är strikt nödvändigt för sammansättningen av en viral partikel och inte heller påverkar det virusets patogena egenskaper. Funktionen av VP2-proteinet påverkas dock inte av signifikanta insättningar i den N-terminala delen, medan insättningar i VP1 minskar dess fosfolipasaktivitet [ 37] .

Kristallstrukturen av VP3-proteinet bestämdes 2002 av Xi och Bew et al [38] .

Serotyper och receptorer

År 2006 hade 11 adenoassocierade virusserotyper beskrivits [ 39] . Alla kända serotyper kan infektera celler i många vävnadstyper . Vävnadsspecificitet bestäms av serotypen för kapsidproteinerna , så adenoassocierade virusvektorer är utformade för att specificera den önskade serotypen.

Serotyp 2

Adeno-associerat virus serotyp 2 har varit den mest omfattande studerade [40] [41] [42] [43] [44] [45] . Adeno-associerat virus serotyp 2 har en naturlig affinitet för skelettmuskulatur [46] , neuroner [40] , vaskulär glatt muskulatur [47] och hepatocyter [48] .

Tre cellulära receptorer har beskrivits för adenoassocierat virus serotyp 2: heparansulfatproteoglykan (HSPG ) , integrin a  Vβ5 och fibroblasttillväxtfaktorreceptor 1 ( FGFR - 1 ) . Den förra är den primära receptorn, de två senare är co-receptorer och tillåter adenoassocierat virus att komma in i cellen genom receptormedierad endocytos [49] [50] [51] [52] . HSPG är signifikant närvarande i den extracellulära substansen och fungerar som en primär receptor, samtidigt som den rensar kroppen från adenoassocierade viruspartiklar och minskar infektionseffektiviteten [53] .  

Studier har visat att adeno-associerat virus serotyp 2 dödar cancerceller utan att skada friska celler. "Våra studier har visat att adenoassocierat virus typ 2, som infekterar en stor population av celler, dödar många typer av cancerceller men inte friska celler", säger Craig Meyer , professor i immunologi och mikrobiologi vid Penn State College of Medicine i Pennsylvania [54] . Dessa studier kan leda till skapandet av nya läkemedel mot cancer.

Andra serotyper

Även om adenoassocierat virus serotyp 2 är den mest populära serotypen inom vetenskaplig forskning, har andra serotyper visat sig vara mer effektiva genleveransvektorer . Till exempel är adenoassocierat virus serotyp 6 bättre på att infektera epitelceller i luftvägarna, serotyp 7-virus har en mycket hög nivå av transduktion av musskelettmuskelceller, serotyp 8-virus transducerar hepatocyter bra [55] [56] [57] , och virus av serotyp 1 och 5 är mycket effektiva och levererar gener till vaskulära endotelceller [58] . Adeno-associerat virus serotyp 6, som är en hybrid av serotyp 1 och 2 [57] , har också lägre immunogenicitet än serotyp 2-virus [56] .

Serotyper skiljer sig åt i de receptorer som de binder till. Till exempel kan transduktion av virus av serotyp 4 och 5 inhiberas av sialinsyralösning [59] , medan virus av serotyp 5 kommer in i celler genom trombocyttillväxtfaktorreceptorn [60] .

Immunsvar

Adeno-associerat virus är av särskilt intresse för genterapi på grund av dess begränsade förmåga att inducera ett immunsvar hos människor. Denna egenskap hos detta virus gör det särskilt lämpligt för transduktion , eftersom det minskar risken för immunpatologier.

Medfödd immunitet

Djur visar ett medfött immunsvar mot adenoassocierat virus. Intravenös administrering av viruset till möss orsakar produktion av inflammatoriska cytokiner , infiltration av neutrofiler och andra leukocyter i levern , vilket tycks minska antalet injicerade viruspartiklar avsevärt [61] .

Humoral immunitet

Det har visat sig att viruset kan orsaka en humoral respons hos både djur och människor. Upp till 80 % av den mänskliga populationen är seropositiva av serotyp 2. Det har visats att neutraliserande antikroppar kan minska transduktionen av adenoassocierade virusvektorer genom flera administreringsvägar [62] .

Cellulär immunitet

Det cellulära immunsvaret mot viruset och vektorer som härrörde från viruset var inte väl förstått förrän 2005 [62] . Kliniska studier av en vektor baserad på adenoassocierat virus serotyp 2 för behandling av hemofili B har visat att destruktion av transducerade celler kan ske [63] . Studier har visat att CD8+ T-lymfocyter kan känna igen element av den adenoassocierade viruskapsiden in vitro [64] , vilket indikerar potentialen för ett cytotoxiskt svar på vektorer i förhållande till T- lymfocyter . Dessa studier är dock ofullständiga och möjligheten till ett sådant cytotoxiskt svar har inte undersökts fullt ut.

Livscykel

I livscykeln för ett adenoassocierat virus, från stadiet av cellinfektion till bildandet av nya viruspartiklar, kan flera stadier urskiljas:

  1. fästning till plasmamembranet
  2. endocytos
  3. rörelse inom endosomen
  4. utgång från sen endosom eller lysosom
  5. flytta till cellkärnan
  6. produktion av replikativt viralt dubbelsträngat DNA
  7. rep -genuttryck
  8. genomisk DNA- replikation
  9. uttryck av cap -gener , syntes av dotter enkelsträngat DNA
  10. virion montering
  11. frisättning av viruspartiklar från en infekterad cell

Vissa av dessa steg kan skilja sig beroende på celltyp. Parametrarna för viral DNA-replikation kan också skilja sig åt mellan celler av samma typ, beroende på stadiet av cellcykeln [65] .

Adeno-associerat virus kan inte replikera i celler som inte är infekterade med adenovirus . Denna egenskap av att bilda virala partiklar indikerar att adenoassocierat virus härstammar från adenovirus. Adenoassocierad virus-DNA-replikation har visat sig underlättas i närvaro av vissa proteiner från adenovirus [66] [67] eller andra virus såsom herpes simplex [68] eller genotoxiska medel som ultraviolett strålning eller hydroxiurea [69] [70 ] [71] .

Den minsta uppsättningen av adenovirusgener som krävs för förökning av adenoassocierade virus beskrevs av Matsushita och Ellinger et al .[66] . Denna upptäckt möjliggjorde skapandet av rekombinanta adenoassocierade virus som inte kräver samtidig infektion med adenovirus. I frånvaro av hjälparvirus eller genotoxiska faktorer kan adenoassocierat virus-DNA infogas i värdgenomet i episomal form. I det första fallet utförs integrering i värdgenomet av Rep78- och Rep68-proteinerna och kräver närvaron av inverterade terminala upprepningar ( ITR ) som flankerar den infogade sekvensen .  Hos möss kan det adenoassocierade virusgenomet finnas som en episom (cirkulärt DNA, huvud-till-svans-orientering) i icke-delande vävnader - till exempel i skelettmuskulaturen [72] .

Se även

Anteckningar

  1. ↑ Taxonomy of Viruses  på webbplatsen för International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) .
  2. ↑ 1 2 ICTV Taxonomy History: Adeno-associerat dependoparvovirus A på ICTV-webbplatsen  ( Nådd  7 maj 2017) .
  3. ↑ 1 2 3 4 5 Rationalisering och utvidgning av taxonomin för familjen Parvoviridae  : [ eng. ] // ICTVonline. — Tilldelad kod: 2013.001a-aaaV. - 2013. - S. 8.
  4. ↑ Grieger JC, Samulski RJ Adeno-associerat virus som genterapivektor: vektorutveckling, produktion och kliniska tillämpningar  (engelska)  // Framsteg inom biokemisk ingenjörskonst/bioteknik. - Berlin , Tyskland , 2005. - Iss. 99 . - S. 119-145. — PMID 16568890 .
  5. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM. Adenovirus-associerade defekta viruspartiklar  (engelska)  // Science. - 1965. - Vol. 149 . - s. 754-756 .
  6. ↑ Smith RH Adeno-associerad virusintegration: virus kontra vektor // Genterapi. - 2008. - T. 15 , nr 11 . - S. 817-822 . - doi : 10.1038/gt.2008.55 .
  7. ↑ Ni TH, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N. Cellulära proteiner som krävs för adenoassocierad virus-DNA-replikation i frånvaro av adenovirussaminfektion // J Virol. - 1998. - T. 72 . - S. 2777-2787 .
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, S.G. et al. (1997), Adeno-associerade virus Rep-proteiner riktar DNA-sekvenser till ett unikt ställe i det mänskliga genomet, Journal of virology v . 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K ​​& Magosin, S et al. (1999), Immunsvar mot adenovirus och adenoassocierat virus hos människor, Genterapi (nr september): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, W.G. et al. (1999), Latent adeno-associerad virusinfektion framkallar humorala men inte cellmedierade immunsvar i en icke-mänsklig primatmodell, Journal of virology (nr oktober): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC et al. (1997), Adeno-associerat virus 2-medierad genöverföring in vivo : organtropism och uttryck av transducerade sekvenser i möss, Gene (nr 29 april): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials, Human Gene Therapy vol. 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, M.G.; Feigin, A; Under, MJ och andra (2007), Säkerhet och tolerabilitet av genterapi med en adenoassocierat virus (AAV)-buren GAD-gen för Parkinsons sjukdom: en öppen fas I-studie, Lancet T. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K., Rohde V., Thaele M., Roth S., Edler L., Schlehofer JR DNA från adenoassocierat virus (AAV) i testikelvävnad och i onormala spermaprover   // Hum . fortplantning. : journal. - 2001. - November ( vol. 16 , nr 11 ). - P. 2333-2337 . — PMID 11679515 .
  15. ↑ Nault JC et al. Återkommande AAV2-relaterad insättningsmutagenes i humana hepatocellulära karcinom // Naturgenetik. — 2015.
  16. ↑ Carter, BJ (2000), Adeno-associerade virus och adeno-associerade virusvektorer för genleverans, i DD Lassic & N Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies , New York City : Marcel Dekker, Inc., sid. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  17. ↑ Bohenzky, R.A.; LeFebvre, RB & Berns, KI (1988), Sekvens- och symmetrikrav inom de interna palindromiska sekvenserna av den adenoassocierade virusterminalen, Virology ( San Diego : Academic Press). - T. 166 (2), PMID 2845646 
  18. ↑ Wang, XS; Ponnazhagan & Srivastava (1995), Rescue and repplication signals of the adeno-associated virus 2 genome, Journal of Molecular Biology vol. 250: 573-80, PMID 7623375 
  19. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, S.R.; Kotin, RM & Owens, RA (1994), adenoassocierat virus (AAV) Rep-proteiner förmedlar komplexbildning mellan AAV-DNA och dess integrationsställe i humant DNA, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 91 (13): 5808-12, PMID 8016070 
  20. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), In vitro packaging of adeno-associated virus DNA, Journal of virology vol 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  21. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P et al. (2001), Nytt cis-verkande replikationselement i det adenoassocierade virus typ 2-genomet är involverat i amplifiering av integrerade rep-cap-sekvenser, Journal of virology vol 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  22. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P et al. (2003), Bevis för packning av rep-cap-sekvenser i adenoassocierade virus (AAV) typ 2-kapsider i frånvaro av inverterade terminala upprepningar: en modell för generering av rep-positiva AAV-partiklar, Journal of virology v . 77, PMID 12477885 
  23. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J et al. (2002), Effektiv integration av rekombinanta adenoassocierade virus-DNA-vektorer kräver en p5-rep-sekvens i cis, Journal of virology v . 76 (11), PMID 11991970 
  24. ↑ Tullis, GE & Shenk, T (2000), Effektiv replikering av adenoassocierade virustyp 2-vektorer: ett cis-verkande element utanför de terminala upprepningarna och en minimal storlek, Journal of virology T. 74 (24), PMID 11090148 
  25. ↑ 1 2 Kyostio, S.R.; Owens, R.A.; Weitzman, M.D. & Antoni, B.A. et al. (1994), Analys av adenoassocierat virus (AAV) vildtyps- och mutanta Rep-proteiner för deras förmåga att negativt reglera AAV p5- och p19-mRNA-nivåer, Journal of virology vol 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  26. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), AAV-ursprungsbindningsproteinet Rep68 är ett ATP-beroende platsspecifikt endonukleas med DNA-helikasaktivitet., Cell T. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  27. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1992), Partiell rening av adenoassocierat virus Rep78, Rep52 och Rep40 och deras biokemiska karakterisering, Journal of virology vol 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  28. ↑ Samulski, RJ (2003), AAV vectors, the future workhorse of human gentherapy, Ernst Schering Research Foundation workshop (nr 43): 25-40, PMID 12894449 
  29. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988a), Reglering av adenoassocierat virusgenuttryck i 293 celler: kontroll av mRNA-förekomst och translation, Journal of virology (nr 1): 68-74, PMID 2824856 
  30. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), Eukaryot translationell kontroll: adenoassocierad virusproteinsyntes påverkas av en mutation i adenovirusets DNA-bindande protein, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America T. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  31. ↑ Becerra, S. P.; Rose, JA; Hardy, M & other (1985), Direkt kartläggning av adenoassocierade viruskapsidproteiner B och C: ett möjligt ACG-initieringskodon, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol. 82 (23): 7919- 23, PMID 2999784 
  32. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), Organisation av kapsidgenen för adenoassocierat virus (AAV): kartläggning av ett mindre splitsat mRNA som kodar för viruskapsidprotein 1, Virology T. 167 (1): 176-84 , PMID 2847413 
  33. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), Platsstyrd mutagenes av adenoassocierat virus typ 2 strukturella proteininitieringskodon: effekter på reglering av syntes och biologisk aktivitet, Journal of virology vol . 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  34. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988b), Alternativ mRNA-splitsning krävs för syntes av adenoassocierat virus VP1-kapsidprotein, Journal of virology v . 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  35. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), Building a better vector: the manipulation of AAV-virions, Virology T. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  36. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z & others (2002), VP1-kapsidproteinet av adenoassocierat virus typ 2 bär på en fosfolipas A2-domän som krävs för virusinfektivitet, The Journal of general virology T. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  37. ↑ Warrington, KH, Jr; Gorbatyuk, OS; Harrison, JK och andra (2004), Adeno-associerat virus typ 2 VP2-kapsidprotein är oväsentligt och kan tolerera stora peptidinsättningar vid dess N-terminal, Journal of virology vol 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  38. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S & others (2002), The atomic structure of adeno-associated virus (AAV-2), en vektor för human genterapi, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 99(16): 10405-10, PMID 12136130 
  39. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), Två nya adeno-associerade virus från cynomolgus apa: pseudotyping karakterisering av kapsidprotein, Virology T. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  40. ↑ 12 Bartlett, J.S .; Samulski, RJ; McCown, TJ och andra (1998), Selektivt och snabbt upptag av adenoassocierat virus typ 2 i hjärnan, Human genterapi vol 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  41. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI och andra (2003), Framgångsrik transgenexpression med seriedoser av aerosoliserade rAAV2-vektorer i rhesusmakaker, Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy vol. 8 (6): 918-26, PMID 14664794 
  42. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL och andra (2001), Effektiv och selektiv AAV2-medierad genöverföring riktad till mänskliga vaskulära endotelceller, Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy vol. 4 (3): 174-81, PMID 11545607 
  43. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), Insättningsmutagenes av AAV2-kapsid och produktion av rekombinant virus, Virology T. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  44. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), RGD-inkludering i VP3 tillhandahåller adenoassocierade virus typ 2 (AAV2)-baserade vektorer med en heparansulfatoberoende cellinträdesmekanism, Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy T. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  45. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T och andra (2000), mutationsanalys av den adenoassocierade virus typ 2 (AAV2) kapsidgenen och konstruktion av AAV2-vektorer med förändrad tropism, Journal of virology vol 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  46. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S & andra (2003), AAV-medierad faktor IX-genöverföring till skelettmuskel hos patienter med svår hemofili B, Blood T. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  47. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J & andra (2000), Adeno-associerad virusvektortransduktion av vaskulära glatta muskelceller in vivo , Physiological genomics vol 2 (3): 117-27, PMID 11015590 
  48. ↑ Koeberl, D.D.; Alexander, IE; Halbert, CL & andra (1997), Ihållande uttryck av human koaguleringsfaktor IX från muslever efter intravenös injektion av adenoassocierade virusvektorer, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 94 (4): 1426 -31, PMID 9037069 
  49. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J & andra (1999), Human fibroblasttillväxtfaktorreceptor 1 är en co-receptor för infektion av adenoassocierat virus 2, Nature medicine T. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  50. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), Membrane-associated heparan sulfate proteoglykan är en receptor för adenoassocierade virus typ 2 virioner, Journal of virology T. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  51. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS & Samulski, RJ (1999), AlphaVbeta5 integrin: a co-receptor for adeno-associated virus type 2-infektion, Nature medicine T. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  52. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), Interaktionen mellan heparinsulfat och adenoassocierat virus 2, Virology T. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  53. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H & andra (2002), Celltypspecifika egenskaper modulerar transduktionseffektiviteten för adenoassocierat virus typ 2 och begränsar infektion av endotelceller, Journal of virology T. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  54. ↑ CNN.com (2005), Vanligt virus 'dödar cancer' , < http://www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html > 
  55. ↑ Gao, G.P.; Alvira, M.R.; Wang, L & other (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol. 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  56. ↑ 12 Halbert , C.L.; Allen, JM & Miller, AD (2001), Adeno-associerade virus typ 6 (AAV6) vektorer förmedlar effektiv transduktion av luftvägsepitelceller i muslungor jämfört med AAV2 vektorer, Journal of virology. (J Virol) Jul; (): T. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  57. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, D.E.; Faust, SM & andra (2004), Cross-dressing the virion: transcapsidering of adenoassociated virus serotypes functionally definitions subgroups, Journal of virology vol 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  58. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA och andra (2005), Effektiv transduktion av vaskulära endotelceller med rekombinanta adenoassocierade virusserotyp 1 och 5 vektorer, Human genterapi vol 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  59. ↑ Kaludov, N; Brown, K.E.; Walters, RW och andra (2001), Adeno-associerat virus serotyp 4 (AAV4) och AAV5 kräver båda sialinsyrabindning för hemagglutination och effektiv transduktion men skiljer sig i sialinsyrabindningsspecificitet, Journal of virology T. 75 (15): 6884- 93, PMID 11435568 
  60. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, B.L.; Stein, CS och andra, Identifiering av PDGFR som receptor för AAV-5-transduktion, Naturmedicin T. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  61. ↑ Zaiss, A.K.; Liu, Q; Bowen, GP och andra (2002), Differential Activation of Innate Immune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors, Journal of Virology vol 76(9): 4580-90, PMID 11932423 
  62. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), Immunsvar mot adenoassocierade virusvektorer, Current Gene Therapy vol. 5 (3): 323-31, PMID 15975009 
  63. ↑ High, K.A.; Mannos, CS; Pierce, GF & Others (2006), Framgångsrik transduktion av levern vid hemofili av AAV-faktor IX och begränsningar som åläggs av värdens immunsvar, Nature Medicine vol. 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  64. ↑ High, K.A.; Sabatino, D.E.; Mingozzi, F & Others (2005), Identifiering av mus AAV-kapsidspecifika CD8+ T-cellsepitoper, Molecular Therapy T. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  65. ↑ Rohr, U.P.; Kronenwett, R; Grimm, D & others (2002), Primära mänskliga celler skiljer sig i sin känslighet för rAAV-2-medierad genöverföring och varaktighet av reportergenexpression, Journal of virological methods vol. 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  66. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C och andra (1998), Adeno-associerade virusvektorer kan effektivt produceras utan hjälparvirus, Gene therapy vol. 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  67. ↑ Myers, M.W.; Laughlin, CA; Jay, FT & other (1980), Adenovirushjälparfunktion för tillväxt av adenoassocierat virus: effekt av temperaturkänsliga mutationer i adenovirus tidig genregion 2, Journal of virology vol 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  68. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), Adeno-associerade virus-DNA-replikationskomplex i herpes simplex-virus eller adenovirus-infekterade celler, The Journal of biological chemistry T. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  69. ↑ Yalkinoglu, A.O.; Heilbronn, R; Bürkle, A & Other (1988), DNA-amplifiering av adenoassocierat virus som ett svar på cellulär genotoxisk stress, Cancer research vol 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  70. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), Replikation av adeno-associerat virus i synkroniserade celler utan tillägg av ett hjälpvirus, Journal of virology T. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  71. ↑ Yakobson, B; Hrynko, T.A.; Peak, MJ & Winocour, E (1989), Replikation av adenoassocierat virus i celler bestrålade med UV-ljus vid 254 nm, Journal of virology vol 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  72. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J och andra (1998), Cirkulära intermediärer av rekombinant adenoassocierat virus har definierade strukturella egenskaper som är ansvariga för långvarig episomal persistens i muskelvävnad, Journal of virology vol 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 


Litteratur

  • Shakhbazov A.V., Severin I.N., Goncharova N.V., Grinev V.V., Kosmacheva S.M., Potapnev M.P. Virala vektorer för stabil transduktion av mänskliga mesenkymala stamceller: system baserade på adenoassocierade virus och lentivirus // Cellteknologier inom biologi och medicin. - 2008. - T. 4 . - S. 216-218 .